無論新人還是熟手,,細胞污染都是必須要面對的,,那對于細胞污染,,我覺得zui好的措施就是預(yù)防為主,,因為細胞一旦污染,,想救是非常困難的,,即便救活,細胞狀態(tài)也會差很多,。所以我先來說下我是怎么預(yù)防細胞污染的,。
生物安全柜是處理細胞的主要場所,也是細胞發(fā)生污染的主要場所,,所以安全柜的正確使用是預(yù)防細胞污染的di一步,。那么安全柜內(nèi)需要注意的小細節(jié)有哪些呢?
首先,,所有進入安全柜的東西在進入前都要用75%的酒精消毒,。特別要注意的是我們的手,只要出了安全柜,,再進入安全柜前都要噴75%的酒精消毒,。實驗耗材盡量放置在合適的容器內(nèi)用報紙包好后滅菌,如*頭插入*頭盒,,其他不規(guī)則的耗材可放入鋁制飯盒內(nèi),。*頭插入*頭盒時要帶手套,因為滅菌可能無法去除*頭上可能粘附的油脂或其他雜質(zhì),。
其次,,安全柜內(nèi)的東西要擺放有序,這個可以根據(jù)個人使用習(xí)慣而定(如果站友使用的是公用安全柜,,則可能需要使用前臨時調(diào)整),,以我為例,移液器和*頭盒(各種規(guī)格備齊)放右邊,,實驗中需要使用的試劑放右前方,,廢液缸放左前方,并保證和試劑有一定安全距離,,右角放置培養(yǎng)皿,,左角放置其他耗材(如試管等),盡量保證常用的東西放右手邊(左撇站友相反),,次常用的東西放左手邊(左撇站友相反),,右邊操作區(qū)域為潔凈區(qū),左邊為非潔凈區(qū)(如廢液缸和其他用剩材料),。
再次,,由于使用安全柜的過程中手和前臂都是要進入安全柜的,,所以有條件的站友應(yīng)該準備至少一件細胞房連體潔凈服(裝入布袋消毒后烘干,在細胞房中取出,,非更換前不得穿出細胞房),,沒有條件的站友則至少準備一副套袖,每次用完后放安全柜中紫外消毒,。
在準備工作一切就緒后,,細胞的處理過程也是大家需要注意的。細胞處理前應(yīng)將當(dāng)次實驗需要的各種試劑,、耗材準備齊備,,盡量減少細胞處理過程中的來回走動。安全柜使用前zui好紫外照射30min滅菌,,然后通風(fēng)5min保證換氣到位,。實驗過程中,所有試劑zui好不用就蓋上瓶蓋,,如果需要打開瓶蓋,,則除了干凈的*頭,其他任何東西都不要從瓶口的正上方經(jīng)過,,防止試劑污染,。細胞培養(yǎng)若使用培養(yǎng)皿,則zui好不要長時間打開皿蓋,。另外移液器也是細胞污染的一個隱藏途徑,,特別是使用無濾芯*頭的站友,在吸取試劑時,,很容易不小心將試劑倒吸入移液器,,如果發(fā)生這種情況,要及時用酒精棉球擦去倒吸的試劑,,特別是培養(yǎng)基,,極易成為細菌生長的溫床。一把污染的移液器可以輕松污染站友的所有細胞,,甚至整個實驗室的細胞,,所以友情推薦有條件的站友在處理細胞時一定要使用帶濾芯的*頭。當(dāng)然即便是使用帶濾芯的*頭,,也要盡量避免試劑倒吸,因為想要*去除倒吸入移液器的試劑非常困難,。
培養(yǎng)箱作為細胞培養(yǎng)的場所,,也需要站友留心。由于培養(yǎng)箱內(nèi)的溫度和濕度很高,,是很適宜細菌生長的,,所以如果有條件(實驗室有2個或以上培養(yǎng)箱),,zui好定期用75%酒精擦拭培養(yǎng)箱,及時定期更換培養(yǎng)箱內(nèi)水槽,。
那么細胞如果還是不幸污染了,,那又該怎么辦呢?我把細胞污染分為早期和晚期兩種,。早期污染是細胞狀態(tài)變差,,但依舊能保持生長,顯微鏡下(光鏡)不可見明顯微生物或可見少量微生物,,這時候我們在換液時建議多用PBS洗幾次,,然后用雙抗原液侵潤細胞1-2min,吸去,,再加入正常培養(yǎng)基,。早期污染只要發(fā)現(xiàn)及時,處理得當(dāng),,救回來的可能性還是很大的,。晚期污染則是細胞形態(tài)發(fā)生明顯改變,細胞停止生長,,顯微鏡下可見明顯微生物,。這時候我建議大家及時清理掉相關(guān)細胞,以免污染其他細胞,,重新復(fù)蘇更早批次的細胞,。所以大家會發(fā)現(xiàn),新細胞收到后,,不應(yīng)急于開展實驗,,而應(yīng)該先小心培養(yǎng),凍存1到2個批次的早期細胞,,然后再開展實驗,,這樣實驗細胞一旦出現(xiàn)問題,可以有庫存細胞保證實驗還能繼續(xù)進行,。
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