無論新人還是熟手,，細胞污染都是必須要面對的,，那對于細胞污染,，我覺得zui好的措施就是預(yù)防為主,，因為細胞一旦污染,，想救是非常困難的,，即便救活，細胞狀態(tài)也會差很多,。所以我先來說下我是怎么預(yù)防細胞污染的,。

      生物安全柜是處理細胞的主要場所，也是細胞發(fā)生污染的主要場所,，所以安全柜的正確使用是預(yù)防細胞污染的di一步,。那么安全柜內(nèi)需要注意的小細節(jié)有哪些呢？

       首先,，所有進入安全柜的東西在進入前都要用75%的酒精消毒,。特別要注意的是我們的手，只要出了安全柜,，再進入安全柜前都要噴75%的酒精消毒,。實驗耗材盡量放置在合適的容器內(nèi)用報紙包好后滅菌，如*頭插入*頭盒,，其他不規(guī)則的耗材可放入鋁制飯盒內(nèi),。*頭插入*頭盒時要帶手套，因為滅菌可能無法去除*頭上可能粘附的油脂或其他雜質(zhì),。

       其次,，安全柜內(nèi)的東西要擺放有序，這個可以根據(jù)個人使用習(xí)慣而定（如果站友使用的是公用安全柜,，則可能需要使用前臨時調(diào)整）,，以我為例，移液器和*頭盒（各種規(guī)格備齊）放右邊,，實驗中需要使用的試劑放右前方,，廢液缸放左前方，并保證和試劑有一定安全距離,，右角放置培養(yǎng)皿,，左角放置其他耗材（如試管等），盡量保證常用的東西放右手邊（左撇站友相反）,，次常用的東西放左手邊（左撇站友相反）,，右邊操作區(qū)域為潔凈區(qū)，左邊為非潔凈區(qū)（如廢液缸和其他用剩材料）,。

       再次,，由于使用安全柜的過程中手和前臂都是要進入安全柜的,，所以有條件的站友應(yīng)該準備至少一件細胞房連體潔凈服（裝入布袋消毒后烘干，在細胞房中取出,，非更換前不得穿出細胞房）,，沒有條件的站友則至少準備一副套袖，每次用完后放安全柜中紫外消毒,。

       在準備工作一切就緒后,，細胞的處理過程也是大家需要注意的。細胞處理前應(yīng)將當(dāng)次實驗需要的各種試劑,、耗材準備齊備,，盡量減少細胞處理過程中的來回走動。安全柜使用前zui好紫外照射30min滅菌,，然后通風(fēng)5min保證換氣到位,。實驗過程中，所有試劑zui好不用就蓋上瓶蓋,，如果需要打開瓶蓋,，則除了干凈的*頭，其他任何東西都不要從瓶口的正上方經(jīng)過,，防止試劑污染,。細胞培養(yǎng)若使用培養(yǎng)皿，則zui好不要長時間打開皿蓋,。另外移液器也是細胞污染的一個隱藏途徑,，特別是使用無濾芯*頭的站友，在吸取試劑時,，很容易不小心將試劑倒吸入移液器,，如果發(fā)生這種情況，要及時用酒精棉球擦去倒吸的試劑,，特別是培養(yǎng)基,，極易成為細菌生長的溫床。一把污染的移液器可以輕松污染站友的所有細胞,，甚至整個實驗室的細胞,，所以友情推薦有條件的站友在處理細胞時一定要使用帶濾芯的*頭。當(dāng)然即便是使用帶濾芯的*頭,，也要盡量避免試劑倒吸，因為想要*去除倒吸入移液器的試劑非常困難,。

       培養(yǎng)箱作為細胞培養(yǎng)的場所,，也需要站友留心。由于培養(yǎng)箱內(nèi)的溫度和濕度很高,，是很適宜細菌生長的,，所以如果有條件（實驗室有2個或以上培養(yǎng)箱）,，zui好定期用75%酒精擦拭培養(yǎng)箱，及時定期更換培養(yǎng)箱內(nèi)水槽,。

       那么細胞如果還是不幸污染了,，那又該怎么辦呢？我把細胞污染分為早期和晚期兩種,。早期污染是細胞狀態(tài)變差,，但依舊能保持生長，顯微鏡下（光鏡）不可見明顯微生物或可見少量微生物,，這時候我們在換液時建議多用PBS洗幾次,，然后用雙抗原液侵潤細胞1-2min，吸去,，再加入正常培養(yǎng)基,。早期污染只要發(fā)現(xiàn)及時，處理得當(dāng),，救回來的可能性還是很大的,。晚期污染則是細胞形態(tài)發(fā)生明顯改變，細胞停止生長,，顯微鏡下可見明顯微生物,。這時候我建議大家及時清理掉相關(guān)細胞，以免污染其他細胞,，重新復(fù)蘇更早批次的細胞,。所以大家會發(fā)現(xiàn)，新細胞收到后,，不應(yīng)急于開展實驗,，而應(yīng)該先小心培養(yǎng)，凍存1到2個批次的早期細胞,，然后再開展實驗,，這樣實驗細胞一旦出現(xiàn)問題，可以有庫存細胞保證實驗還能繼續(xù)進行,。