PMSF是絲氨酸蛋白酶和乙酰膽堿酯酶抑制劑,。它抑制蛋白酶,,如糜蛋白酶、胰蛋白酶,、木瓜蛋白酶、巰基蛋白酶如凝血酶,。PMSF抑制絲氨酸蛋白酶的磺化的絲氨酸殘基的活性部位,。
PMSF的配制方法:
溶解174mg的PMSF(苯鉀基磺酰氟)于足量的異丙醇中,定容到10ml,,分裝成小份貯存于-20℃,,使用時(shí)終濃度一般為1mmol/L,。
使用介紹:
1)抑制絲氨酸蛋白酶(如胰蛋白酶,胰凝乳蛋白酶,,凝血酶)和巰基蛋白酶(如木瓜蛋白酶),;
2)10mg/ml溶于異丙醇(或無(wú)水乙醇)中;
3)在室溫可保存一年,一般保存在-20度或4度.,;
4)工作濃度:17~174ug/ml(0.1~1mM),,儲(chǔ)存液濃度為100或200mM;
5) 在水液體溶液中不穩(wěn)定,,30分鐘就會(huì)降解一半,,必須在每一分離和純化步驟中加入新鮮的PMSF,樣品處理超過(guò)1h,補(bǔ)加一次,。(見(jiàn)水分解,,使用前加入);
注意事項(xiàng):
1.PMSF(苯鉀基磺酰氟)溶解到異丙醇中,,不能溶解到水中的,。-20℃保存也會(huì)有結(jié)晶析出,這是正常的,,等到溫度稍高混勻就可以了,。
2.PMSF嚴(yán)重?fù)p害呼吸道粘膜、眼睛及皮膚,,吸入,、吞進(jìn)或通過(guò)皮膚吸收后有致命危險(xiǎn)。一定要注意防護(hù),,手套和口罩,。
3.一旦眼睛或皮膚接觸了PMSF,應(yīng)立即用大量水沖洗之,。凡被PMSF污染的衣物應(yīng)予丟棄,。
4.PMSF在水溶液中不穩(wěn)定。應(yīng)在使用前從貯存液中現(xiàn)用現(xiàn)加于裂解緩沖液中,。
5.PMSF在水溶液中的活性喪失速率隨pH值的升高而加快,,且25℃的失活速率高于4℃。pH值為8.0時(shí),,20μmmol/l PMSF水溶液的半壽期大約為85min,,這表明將PMSF溶液調(diào)節(jié)為堿性(pH>8.6)并在室溫放置數(shù)小時(shí)后,可安全地予以丟棄,。
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