【實驗方法與步驟】

  （1）細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)：HeLa細(xì)胞常規(guī)傳代培養(yǎng)至對數(shù)生長期(見細(xì)胞傳代培養(yǎng)）。實驗組細(xì)胞加入順鉑溶液（生理鹽水配置）至終濃度為20μmo1/L,37℃,，5% CO2條件下繼續(xù)培養(yǎng),。空白實驗對照加入等體積的生理鹽水,，同樣條件繼續(xù)培養(yǎng),。24h后進行染色及形態(tài)學(xué)觀察。

  （2）胰酶消化細(xì)胞,，將培養(yǎng)基上清及消化下來的細(xì)胞一同轉(zhuǎn)入離心管中600~800r/min離心10min,。

  （3）吸去上清，用1mL PBS重懸細(xì)胞沉淀,，并轉(zhuǎn)入1.5mL微量離心管中，600~800r/min離心10min,。

  （4）吸去上清,，用500μL PBS重量細(xì)胞沉淀，取178μL轉(zhuǎn)入0.5mL的微量離心管中,，加入PI 20μL（終濃度100μg/mL）,，Hoechest 33342 2μL（終濃度10μg/mL），混勻，37℃溫箱中避光標(biāo)記15min,。

  （5）600~800r/min離心10min,，棄上清，加50μL PBS重懸細(xì)胞,。

  （6）分別從實驗組及對照組中取10μL細(xì)胞懸液滴于載玻片上,，蓋上蓋玻片。

  （7）熒光顯微鏡20倍物鏡在紫外光激發(fā)下觀察,，可觀察到凋亡細(xì)胞核形態(tài)發(fā)生明顯的改變,，出現(xiàn)染色質(zhì)凝集及邊緣化。

  【注意事項】

  （1）誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡后收集細(xì)胞時,，注意要同時收集細(xì)胞培養(yǎng)基上清液,。

  （2）懸浮細(xì)胞時動作要輕柔，避免損傷細(xì)胞,。

  （3）在實驗中可同時設(shè)計壞死細(xì)胞的對照,，例如，取正常細(xì)胞經(jīng)低滲后進行染色觀察,。