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雙熒光素技術(shù)

時間:2022/5/23閱讀:1157
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熒光素酶報告基因系統(tǒng)是以熒光素(luciferin)為底物來檢測熒光素酶活性的一種報告系統(tǒng),。熒光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin,,在luciferin氧化的過程中,會發(fā)出生物熒光(bioluminescence),。然后可以通過熒光測定儀(化學(xué)發(fā)光儀)測定luciferin氧化過程中釋放的生物熒光,。熒光素和熒光素酶這一生物發(fā)光體系,可以極其靈敏,、高效地檢測基因的表達(dá),。

雙熒光素酶體系,即有兩種熒光素酶,,比較常見的組合是螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶,,螢火蟲熒光素酶作用于甲蟲熒光素,而海腎熒光素酶在氧的存在下作用于海腎熒光素,。以其中一個作為內(nèi)參對照,,即表達(dá)量基本恒定,用于減少試驗中不同處理間所固有的變化,,包括培養(yǎng)細(xì)胞的數(shù)目及活力的差異,,細(xì)胞轉(zhuǎn)染及裂解的效率,而另外一個熒光素酶則作為報告基因,,用于指示不同處理條件下基因的表達(dá)情況,。

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