流式細(xì)胞術(shù)檢測|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)

時間：2015/8/1閱讀：264

關(guān)鍵詞:流式細(xì)胞術(shù)檢測|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
簡介：世界*品牌流式細(xì)胞術(shù)檢測|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)原裝，質(zhì)量保證,*,。
流式細(xì)胞術(shù)檢測|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系,。
我們具備豐富的蛋白表達(dá)設(shè)計(jì)經(jīng)驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)操作技巧,，承諾客戶不成功不收費(fèi)。我們所有的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)真實(shí)可信,，我們提供原始的表達(dá)菌株和克隆質(zhì)粒,，客戶可以依據(jù)我們的實(shí)驗(yàn)報(bào)告重復(fù)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
產(chǎn)品品牌： http://www.,。,。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
測序?qū)嶒?yàn)流程：
PI 染色操作步驟
1、將單細(xì)胞懸液加入2ml圓底離心管中,，離心,，1500rpm , 5min，棄上清液,。
2,、加入PBS 1ml離心洗滌1次，棄上清,。
3,、加入2ml預(yù)冷的70%酒精，4℃固定30min,，或是-20℃固定,。
4、離心,，棄上清液,。
5、用1×PBS 1ml洗滌1次,，離心,。
6、加入RNase A (工作濃度20ug/ml)于500ul 1×PBS中,，37℃孵育30min,，離心。
7,、用1×PBS 1ml洗滌1次,，離心。
8,、加入PI(工作濃度50ug/ml) 于500ul 1×PBS中,，室溫避光孵育30min。
9,、混勻,，過300目篩網(wǎng)，置流式管中， 4℃冰箱保存,，待測,。
細(xì)胞表面直接免疫熒光染色操作步驟
1、將單細(xì)胞懸液加入2ml圓底離心管中,，離心,，1500rpm，5min,，棄上清液,。
2、以冷PBA 1ml,，離心洗滌,，棄上清液。
3,、加入用PBA稀釋的熒光素標(biāo)記的抗體200ul,。用微量移液器輕輕吹打混勻，4℃或置冰上孵育30min-1h,。
4,、離心棄上清液。
5,、加入冷PBS1ml,離心洗滌2次,，以除去未結(jié)合的多余抗體成分。
6,、向細(xì)胞中加入冷PBS 500ul,吹打混勻,，置流式管中，4℃避光保存,，待測。
細(xì)胞表面間接免疫熒光染色操作步驟
1-2,、同細(xì)胞表面直接免疫熒光染色操作步驟
3,、用PBA稀釋的*抗體200ul，對照管加入對應(yīng)于一抗的正常實(shí)驗(yàn)動物IgG,，輕輕吹打混勻,，4℃或置冰上孵育1.5-2h。離心,，棄上清,。
4、 BS1ml離心洗滌1次,，以去除多余的未結(jié)合的特異性抗體,。
5、 PBA適當(dāng)稀釋的熒光素標(biāo)記的第二抗體200ul。吹打混勻,，4℃或置冰上孵育30min,，避光。
6,、 PBS 1ml離心洗滌2次,。
7、將細(xì)胞重新懸浮于500ulPBS中,，混勻,，置流式管中，避光,，4℃冰箱保存,，待測。
胞內(nèi)直接免疫熒光染色操作步驟
1,、將單細(xì)胞懸液加入2ml圓底離心管中,，離心，1500rpm , 5min,，棄上清液,。
2、用1×PBS1ml洗滌1次,，離心,。
3、4%PFA 1ml,，4℃固定30min,。
4、用1×PBS1ml洗滌1次,，離心,。
5、0,、1% Triton-100 1ml, 室溫10min,。
6、用1×PBS1ml洗滌1次,，離心,。
7,、加入用PBA稀釋的熒光素標(biāo)記的抗體200ul，用微量移液器輕輕吹打混勻，4℃或置冰上孵育30min-1h,。
8,、離心棄上清液,。
9,、加入冷PBS1ml,離心洗滌2次,，以除去未結(jié)合的多余抗體成分。
10,、向細(xì)胞中加入冷PBS500ul,吹打混勻,，置流式管中，4℃避光保存,，待測,。
備注：
1、RNase A：貯液濃度：1mg/ml,；
工作液配制：加1 mg/ml貯液 10ul于500ul 1×PBS中,，使終濃度為 20ug/ml。
2,、PI：貯液濃度：2,、5mg/ml；
工作液配制：加2,、5 mg/ml貯液 10ul于500ul 1×PBS中,，使終濃度為 50ug/ml。
3,、PBA：即PBS加1-2% 牛血清白蛋白,，加0、1%疊氮鈉,。
4,、檢測樣品細(xì)胞濃度1x106 /ml。
流式細(xì)胞術(shù)測細(xì)胞表面抗原步驟
1. 定量細(xì)胞濃度
2. 分為2組,，一組為實(shí)驗(yàn)組,，另一組為抗體對照組
3. 兩組都先加入非特異性的IgG，封閉可能的Fc受體
4. 按照抗體生產(chǎn)廠家的推薦濃度加入抗體,，對照組加入同樣熒光標(biāo)記的非特異性同型抗體,。
5. 4°孵育半小時
6. 用含0.5% BSA的PBS洗2遍
7. 上機(jī)后先用抗體對照組設(shè)置陰性Gate。
8. 檢測樣本,。

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