關(guān)鍵詞:流式細胞術(shù)檢測|實驗技術(shù)服務(wù)
簡介：世界*品牌流式細胞術(shù)檢測|實驗技術(shù)服務(wù)原裝,，質(zhì)量保證,*,。
流式細胞術(shù)檢測|實驗技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系,。
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產(chǎn)品品牌： http://www.。,。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
測序?qū)嶒灹鞒蹋?br>PI 染色操作步驟
1,、將單細胞懸液加入2ml圓底離心管中，離心,，1500rpm , 5min,，棄上清液。
2,、加入PBS 1ml離心洗滌1次,，棄上清。
3,、加入2ml預(yù)冷的70%酒精,，4℃固定30min，或是-20℃固定,。
4,、離心，棄上清液,。
5,、用1×PBS 1ml洗滌1次，離心,。
6,、加入RNase A (工作濃度20ug/ml)于500ul 1×PBS中，37℃孵育30min,，離心,。
7、用1×PBS 1ml洗滌1次,，離心,。
8、加入PI(工作濃度50ug/ml) 于500ul 1×PBS中,，室溫避光孵育30min,。
9、混勻,，過300目篩網(wǎng),，置流式管中， 4℃冰箱保存,，待測,。
細胞表面直接免疫熒光染色操作步驟
1、將單細胞懸液加入2ml圓底離心管中,，離心,，1500rpm,，5min，棄上清液,。
2,、以冷PBA 1ml,，離心洗滌,，棄上清液。
3,、加入用PBA稀釋的熒光素標(biāo)記的抗體200ul,。用微量移液器輕輕吹打混勻，4℃或置冰上孵育30min-1h,。
4,、離心棄上清液。
5,、加入冷PBS1ml,離心洗滌2次,，以除去未結(jié)合的多余抗體成分。
6,、向細胞中加入冷PBS 500ul,吹打混勻,，置流式管中，4℃避光保存,，待測,。
細胞表面間接免疫熒光染色操作步驟
1-2、同細胞表面直接免疫熒光染色操作步驟
3,、 用PBA稀釋的*抗體200ul,，對照管加入對應(yīng)于一抗的正常實驗動物IgG，輕輕吹打混勻,，4℃或置冰上孵育1.5-2h,。離心，棄上清,。
4,、 BS1ml離心洗滌1次，以去除多余的未結(jié)合的特異性抗體,。
5,、 PBA適當(dāng)稀釋的熒光素標(biāo)記的第二抗體200ul。吹打混勻,，4℃或置冰上孵育30min,，避光。
6,、 PBS 1ml離心洗滌2次,。
7,、將細胞重新懸浮于500ulPBS中，混勻,，置流式管中,，避光，4℃冰箱保存,，待測,。
胞內(nèi)直接免疫熒光染色操作步驟
1、將單細胞懸液加入2ml圓底離心管中,，離心,，1500rpm , 5min，棄上清液,。
2,、用1×PBS1ml洗滌1次，離心,。
3,、4%PFA 1ml，4℃固定30min,。
4,、用1×PBS1ml洗滌1次，離心,。
5,、0、1% Triton-100 1ml, 室溫10min,。
6,、用1×PBS1ml洗滌1次，離心,。
7,、加入用PBA稀釋的熒光素標(biāo)記的抗體200ul，用微量移液器輕輕吹打混勻,，4℃或置冰上孵育30min-1h,。
8、離心棄上清液,。
9,、加入冷PBS1ml,離心洗滌2次，以除去未結(jié)合的多余抗體成分,。
10,、向細胞中加入冷PBS500ul,吹打混勻，置流式管中,，4℃避光保存,，待測,。
備注：
1、RNase A：貯液濃度：1mg/ml,；
工作液配制：加1 mg/ml貯液 10ul于500ul 1×PBS中,，使終濃度為 20ug/ml。
2,、PI：貯液濃度：2,、5mg/ml；
工作液配制：加2,、5 mg/ml貯液 10ul于500ul 1×PBS中,，使終濃度為 50ug/ml,。
3,、PBA：即PBS加1-2% 牛血清白蛋白，加0,、1%疊氮鈉,。
4、檢測樣品細胞濃度1x106 /ml,。
流式細胞術(shù)測細胞表面抗原步驟
1. 定量細胞濃度
2. 分為2組,，一組為實驗組，另一組為抗體對照組
3. 兩組都先加入非特異性的IgG,，封閉可能的Fc受體
4. 按照抗體生產(chǎn)廠家的推薦濃度加入抗體,，對照組加入同樣熒光標(biāo)記的非特異性同型抗體。
5. 4°孵育半小時
6. 用含0.5% BSA的PBS洗2遍
7. 上機后先用抗體對照組設(shè)置陰性Gate,。
8. 檢測樣本,。
