流式細胞術服務|實驗技術服務

時間：2015/8/1閱讀：275

關鍵詞:流式細胞術服務|實驗技術服務
簡介：世界*品牌流式細胞術服務|實驗技術服務原裝,，質(zhì)量保證,*,。
流式細胞術服務|實驗技術服務——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
我們具備豐富的蛋白表達設計經(jīng)驗及實驗操作技巧,，承諾客戶不成功不收費,。我們所有的實驗數(shù)據(jù)真實可信，我們提供原始的表達菌株和克隆質(zhì)粒,，客戶可以依據(jù)我們的實驗報告重復我們的實驗結果,。
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測序?qū)嶒灹鞒蹋?br>PI 染色操作步驟
1,、將單細胞懸液加入2ml圓底離心管中，離心,，1500rpm , 5min,，棄上清液。
2,、加入PBS 1ml離心洗滌1次,，棄上清,。
3、加入2ml預冷的70%酒精,，4℃固定30min,，或是-20℃固定。
4,、離心,，棄上清液。
5,、用1×PBS 1ml洗滌1次,，離心。
6,、加入RNase A (工作濃度20ug/ml)于500ul 1×PBS中,，37℃孵育30min，離心,。
7,、用1×PBS 1ml洗滌1次，離心,。
8,、加入PI(工作濃度50ug/ml) 于500ul 1×PBS中，室溫避光孵育30min,。
9,、混勻，過300目篩網(wǎng),，置流式管中,， 4℃冰箱保存,，待測,。
GFP PI染色操作步驟
1、將單細胞懸液加入2ml圓底離心管中,，離心,，1500rpm , 5min，棄上清液,。
2,、加入PBS 1ml離心洗滌1次，棄上清,。
3,、加入2ml預冷PFA，PFA的濃度根據(jù)細胞的特點進行調(diào)節(jié),，4℃固定30min,。
以下步驟同PI 染色操作步驟的
細胞表面直接免疫熒光染色操作步驟
1,、將單細胞懸液加入2ml圓底離心管中，離心,，1500rpm,，5min，棄上清液,。
2,、以冷PBA 1ml，離心洗滌,，棄上清液,。
3、加入用PBA稀釋的熒光素標記的抗體200ul,。用微量移液器輕輕吹打混勻,，4℃或置冰上孵育30min-1h。
4,、離心棄上清液,。
5、加入冷PBS1ml,離心洗滌2次,，以除去未結合的多余抗體成分,。
6、向細胞中加入冷PBS 500ul,吹打混勻,，置流式管中,，4℃避光保存，待測,。
細胞表面間接免疫熒光染色操作步驟
1-2,、同細胞表面直接免疫熒光染色操作步驟
3、用PBA稀釋的*抗體200ul,，對照管加入對應于一抗的正常實驗動物IgG,，輕輕吹打混勻，4℃或置冰上孵育1.5-2h,。離心,，棄上清。
4,、 BS1ml離心洗滌1次,，以去除多余的未結合的特異性抗體。
5,、 PBA適當稀釋的熒光素標記的第二抗體200ul,。吹打混勻，4℃或置冰上孵育30min,，避光,。
6,、 PBS 1ml離心洗滌2次。
7,、將細胞重新懸浮于500ulPBS中,，混勻，置流式管中,，避光,，4℃冰箱保存，待測,。
胞內(nèi)直接免疫熒光染色操作步驟
1,、將單細胞懸液加入2ml圓底離心管中，離心,，1500rpm , 5min,，棄上清液。
2,、用1×PBS1ml洗滌1次,，離心。
3,、4%PFA 1ml,，4℃固定30min。
4,、用1×PBS1ml洗滌1次,，離心。
5,、0,、1% Triton-100 1ml, 室溫10min。
6,、用1×PBS1ml洗滌1次,，離心。
7,、加入用PBA稀釋的熒光素標記的抗體200ul,，用微量移液器輕輕吹打混勻，4℃或置冰上孵育30min-1h,。
8、離心棄上清液,。
9,、加入冷PBS1ml,離心洗滌2次，以除去未結合的多余抗體成分,。
10,、向細胞中加入冷PBS500ul,吹打混勻,，置流式管中，4℃避光保存,，待測,。
胞內(nèi)間接免疫熒光染色操作步驟
1-6、同胞內(nèi)直接免疫熒光染色操作步驟
7,、加入用PBA稀釋的*抗體200ul,，對照管加入對應于一抗的正常實驗動物IgG，輕輕吹打混勻,，4℃或置冰上孵育1,、5-2h。離心,，棄上清,。
8、冷PBS1ml離心洗滌1次,，以去除多余的未結合的特異性抗體,。
9、加入PBA適當稀釋的熒光素標記的第二抗體200ul,。吹打混勻,，4℃或置冰上孵育30min，避光,。
10,、冷PBA1ml離心洗滌2次。
11,、將細胞重新懸浮于500ulPBS中,，混勻，置流式管中,，避光,，4℃冰箱保存，待測,。

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