關(guān)鍵詞:流式細胞術(shù)|實驗技術(shù)服務(wù)
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流式細胞術(shù)|實驗技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
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測序?qū)嶒灹鞒蹋?br>PI 染色操作步驟
1,、將單細胞懸液加入2ml圓底離心管中，離心,，1500rpm , 5min,，棄上清液。
2,、加入PBS 1ml離心洗滌1次,，棄上清。
3,、加入2ml預(yù)冷的70%酒精,，4℃固定30min，或是-20℃固定,。
4,、離心，棄上清液,。
5,、用1×PBS 1ml洗滌1次,，離心。
6,、加入RNase A (工作濃度20ug/ml)于500ul 1×PBS中,，37℃孵育30min，離心,。
7,、用1×PBS 1ml洗滌1次，離心,。
8,、加入PI(工作濃度50ug/ml) 于500ul 1×PBS中，室溫避光孵育30min,。
9,、混勻，過300目篩網(wǎng),，置流式管中,， 4℃冰箱保存，待測,。
GFP PI染色操作步驟
1,、將單細胞懸液加入2ml圓底離心管中，離心,，1500rpm , 5min,，棄上清液。
2,、加入PBS 1ml離心洗滌1次,，棄上清。
3,、加入2ml預(yù)冷PFA,，PFA的濃度根據(jù)細胞的特點進行調(diào)節(jié)，4℃固定30min,。
以下步驟同PI 染色操作步驟的
細胞表面直接免疫熒光染色操作步驟
1,、將單細胞懸液加入2ml圓底離心管中，離心,，1500rpm,，5min，棄上清液,。
2,、以冷PBA 1ml，離心洗滌,，棄上清液,。
3,、加入用PBA稀釋的熒光素標記的抗體200ul。用微量移液器輕輕吹打混勻,，4℃或置冰上孵育30min-1h,。
4、離心棄上清液,。
5,、加入冷PBS1ml,離心洗滌2次，以除去未結(jié)合的多余抗體成分,。
6,、向細胞中加入冷PBS 500ul,吹打混勻，置流式管中,，4℃避光保存,，待測。
細胞表面間接免疫熒光染色操作步驟
1-2,、同細胞表面直接免疫熒光染色操作步驟
3,、 用PBA稀釋的*抗體200ul，對照管加入對應(yīng)于一抗的正常實驗動物IgG,，輕輕吹打混勻,，4℃或置冰上孵育1.5-2h。離心,，棄上清。
4,、 BS1ml離心洗滌1次,，以去除多余的未結(jié)合的特異性抗體。
5,、 PBA適當稀釋的熒光素標記的第二抗體200ul,。吹打混勻，4℃或置冰上孵育30min,，避光,。
6、 PBS 1ml離心洗滌2次,。
7,、將細胞重新懸浮于500ulPBS中，混勻,，置流式管中,，避光，4℃冰箱保存,，待測,。