關(guān)鍵詞:454(GS FLX系統(tǒng))超高通量測序|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
簡介：世界*品牌454(GS FLX系統(tǒng))超高通量測序|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)原裝,，質(zhì)量保證,*,。
454(GS FLX系統(tǒng))超高通量測序|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系,。
我們具備豐富的蛋白表達(dá)設(shè)計經(jīng)驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)操作技巧,，承諾客戶不成功不收費(fèi),。在獲得重組蛋白產(chǎn)品的同時,，我們也會提供相應(yīng)的原始數(shù)據(jù)和原始圖片,不需要再額外花費(fèi)精力重復(fù)實(shí)驗(yàn),。另一方面，我們所有的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)真實(shí)可信,，我們提供原始的表達(dá)菌株和克隆質(zhì)粒,，客戶可以依據(jù)我們的實(shí)驗(yàn)報告重復(fù)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
產(chǎn)品品牌：454(GS FLX系統(tǒng))超高通量測序|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)   http://www.,。,。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
實(shí)驗(yàn)描述               
GS FLX系統(tǒng)的工作流程
GS FLX系統(tǒng)的流程概括起來，就是“一個片段 = 一個磁珠 = 一條讀長（One fragment = One bead = One read）",。
1）樣品輸入并片段化：GS FLX系統(tǒng)支持各種不同來源的樣品,，包括基因組DNA、PCR產(chǎn)物,、BAC,、cDNA、小分子RNA等等,。大的樣品例如基因組DNA或者BAC等被打斷成300－800 bp的片段,；對于小分子的非編碼RNA或者PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，這一步則不需要,。
2）文庫制備：借助一系列標(biāo)準(zhǔn)的分子生物學(xué)技術(shù),，將A和B接頭（3’和5’端具有特異性）連接到DNA段上。接頭也將用于后續(xù)的純化，擴(kuò)增和測序步驟,。變性處理回收單鏈的DNA（sstDNA）,，具有A、B接頭的單鏈DNA段組成了樣品文庫,。
3）一個DNA段＝一個磁珠：單鏈DNA文庫被固定在特別設(shè)計的DNA捕獲磁珠上,。每一個磁珠攜帶了一個*的單鏈DNA段。磁珠結(jié)合的文庫被擴(kuò)增試劑乳化,，形成油包水的混合物,，這樣就形成了只包含一個磁珠和一個*片段的微反應(yīng)器。
4）乳液PCR擴(kuò)增：每個*的片段在自己的微反應(yīng)器里進(jìn)行獨(dú)立的擴(kuò)增,，而沒有其他的競爭性或者污染性序列的影響,。整個片段文庫的擴(kuò)增平行進(jìn)行。對于每一個片段而言,，擴(kuò)增后產(chǎn)生了幾百萬個相同的拷貝,。隨后，乳液混合物被打破,，擴(kuò)增的片段仍然結(jié)合在磁珠上,。
5）一個磁珠＝一條讀長：攜帶DNA的捕獲磁珠隨后放入“Pico TiterPlate"（PTP）板中進(jìn)行后繼的測序。PTP孔的直徑（29um）只能容納一個磁珠（20um）,。然后將PTP板放置在GS FLX中,，測序開始。放置在四個單獨(dú)的試劑瓶里的四種堿基,，依照T,、A、C,、G的順序依次循環(huán)進(jìn)入PTP板,，每次只進(jìn)入一個堿基。如果發(fā)生堿基配對,，就會釋放一個焦磷酸,。這個焦磷酸在ATP硫酸化酶和螢光素酶的作用下，經(jīng)過一個合成反應(yīng)和一個化學(xué)發(fā)光反應(yīng),，zui終將螢光素氧化成氧化螢光素,，同時釋放出光信號。此反應(yīng)釋放出的光信號實(shí)時被儀器配置的高靈敏度CCD相機(jī)捕獲到,。有一個堿基和測序模板進(jìn)行配對,，就會捕獲到一分子的光信號；由此一一對應(yīng),，就可以準(zhǔn)確,、快速地確定待測模板的堿基序列,。這也就是大名鼎鼎的焦磷酸測序。
6）數(shù)據(jù)分析：GS FLX系統(tǒng)在10小時的運(yùn)行當(dāng)中可獲得100多萬個讀長,，讀取超過4-6億個堿基信息,。GS FLX 系統(tǒng)提供兩種不同的生物信息學(xué)工具對測序數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，適用于不同的應(yīng)用：達(dá)400 MB的從頭拼接和任何大小基因組的重測序,。
GS FLX系統(tǒng)的準(zhǔn)確率在99%以上,。其主要限制來自同聚物，也就是相同堿基的連續(xù)摻入,，如AAA或GGG,。由于沒有終止元件來阻止單個循環(huán)的連續(xù)摻入，同聚物的長度就需要從信號強(qiáng)度中推斷出來,。這個過程就可能產(chǎn)生誤差,。因此，454測序平臺的主要錯誤類型是插入-缺失,，而不是替換,。