關鍵詞:454(GS FLX系統(tǒng))超高通量測序|實驗技術服務
簡介：世界*品牌454(GS FLX系統(tǒng))超高通量測序|實驗技術服務原裝,，質量保證,*。
454(GS FLX系統(tǒng))超高通量測序|實驗技術服務——pCzn1質粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系,。
我們具備豐富的蛋白表達設計經驗及實驗操作技巧,，承諾客戶不成功不收費。在獲得重組蛋白產品的同時,，我們也會提供相應的原始數據和原始圖片,不需要再額外花費精力重復實驗,。另一方面，我們所有的實驗數據真實可信,，我們提供原始的表達菌株和克隆質粒,，客戶可以依據我們的實驗報告重復我們的實驗結果。
產品品牌：454(GS FLX系統(tǒng))超高通量測序|實驗技術服務   http://www.,。,。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
實驗描述               
GS FLX系統(tǒng)的工作流程
GS FLX系統(tǒng)的流程概括起來，就是“一個片段 = 一個磁珠 = 一條讀長（One fragment = One bead = One read）",。
1）樣品輸入并片段化：GS FLX系統(tǒng)支持各種不同來源的樣品,，包括基因組DNA、PCR產物,、BAC,、cDNA、小分子RNA等等,。大的樣品例如基因組DNA或者BAC等被打斷成300－800 bp的片段,；對于小分子的非編碼RNA或者PCR擴增產物，這一步則不需要,。
2）文庫制備：借助一系列標準的分子生物學技術,，將A和B接頭（3’和5’端具有特異性）連接到DNA段上。接頭也將用于后續(xù)的純化,，擴增和測序步驟,。變性處理回收單鏈的DNA（sstDNA）,，具有A、B接頭的單鏈DNA段組成了樣品文庫,。
3）一個DNA段＝一個磁珠：單鏈DNA文庫被固定在特別設計的DNA捕獲磁珠上。每一個磁珠攜帶了一個*的單鏈DNA段,。磁珠結合的文庫被擴增試劑乳化,，形成油包水的混合物，這樣就形成了只包含一個磁珠和一個*片段的微反應器,。
4）乳液PCR擴增：每個*的片段在自己的微反應器里進行獨立的擴增,，而沒有其他的競爭性或者污染性序列的影響。整個片段文庫的擴增平行進行,。對于每一個片段而言,，擴增后產生了幾百萬個相同的拷貝。隨后,，乳液混合物被打破,，擴增的片段仍然結合在磁珠上。
5）一個磁珠＝一條讀長：攜帶DNA的捕獲磁珠隨后放入“Pico TiterPlate"（PTP）板中進行后繼的測序,。PTP孔的直徑（29um）只能容納一個磁珠（20um）,。然后將PTP板放置在GS FLX中，測序開始,。放置在四個單獨的試劑瓶里的四種堿基,，依照T、A,、C,、G的順序依次循環(huán)進入PTP板，每次只進入一個堿基,。如果發(fā)生堿基配對,，就會釋放一個焦磷酸。這個焦磷酸在ATP硫酸化酶和螢光素酶的作用下,，經過一個合成反應和一個化學發(fā)光反應,，zui終將螢光素氧化成氧化螢光素，同時釋放出光信號,。此反應釋放出的光信號實時被儀器配置的高靈敏度CCD相機捕獲到,。有一個堿基和測序模板進行配對，就會捕獲到一分子的光信號,；由此一一對應,，就可以準確、快速地確定待測模板的堿基序列,。這也就是大名鼎鼎的焦磷酸測序,。
6）數據分析：GS FLX系統(tǒng)在10小時的運行當中可獲得100多萬個讀長,，讀取超過4-6億個堿基信息。GS FLX 系統(tǒng)提供兩種不同的生物信息學工具對測序數據進行分析,，適用于不同的應用：達400 MB的從頭拼接和任何大小基因組的重測序,。
GS FLX系統(tǒng)的準確率在99%以上。其主要限制來自同聚物,，也就是相同堿基的連續(xù)摻入,，如AAA或GGG。由于沒有終止元件來阻止單個循環(huán)的連續(xù)摻入,，同聚物的長度就需要從信號強度中推斷出來,。這個過程就可能產生誤差。因此,，454測序平臺的主要錯誤類型是插入-缺失,，而不是替換。