關(guān)鍵詞:蛋白雙向電泳|實驗技術(shù)服務
簡介：世界*品牌蛋白雙向電泳|實驗技術(shù)服務原裝，質(zhì)量保證,*,。
蛋白雙向電泳|實驗技術(shù)服務——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系,。
我們具備豐富的蛋白表達設(shè)計經(jīng)驗及實驗操作技巧，承諾客戶不成功不收費,。在獲得重組蛋白產(chǎn)品的同時,，我們也會提供相應的原始數(shù)據(jù)和原始圖片,不需要再額外花費精力重復實驗。另一方面,，我們所有的實驗數(shù)據(jù)真實可信,，我們提供原始的表達菌株和克隆質(zhì)粒，客戶可以依據(jù)我們的實驗報告重復我們的實驗結(jié)果,。
產(chǎn)品品牌： http://www.,。。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
測序?qū)嶒灹鞒蹋?br>蛋白質(zhì)組研究的發(fā)展以雙向電泳技術(shù)作為核心. 雙向電泳由O’Farrell’s于1975年建立并成功地分離約1 000個E.coli蛋白,，并表明蛋白質(zhì)譜不是穩(wěn)定的,，而是隨環(huán)境而變化. 雙向電泳原理簡明，*向進行等電聚焦,，蛋白質(zhì)沿pH梯度分離,，至各自的等電點；隨后,，再沿垂直的方向進行分子量的分離. 目前,，隨著技術(shù)的飛速發(fā)展，已能分離出10 000個斑點（spot). 當雙向電泳斑點的全面分析成為現(xiàn)實的時候,，蛋白質(zhì)組的分析變得可行,。
*向等電聚焦
⒈ 從冰箱中取-20℃冷凍保存的水化上樣緩沖液（I）（不含DTT,，不含Bio-Lyte）一小管（1ml/管），置室溫溶解,。
⒉ 在小管中加入0.01g DTT,， Bio-Lyte 4-6、5-7各2.5ml,，充分混勻,。
⒊ 從小管中取出400ml水化上樣緩沖液，加入100ml樣品,，充分混勻,。
⒋ 從冰箱中取-20℃冷凍保存的IPG預制膠條（17cm pH 4-7），室溫中放置10分鐘,。
⒌ 沿著聚焦盤或水化盤中槽的邊緣至左而右線性加入樣品,。在槽兩端各1cm左右不要加樣，中間的樣品液一定要連貫,。注意：不要產(chǎn)生氣泡,。否則影響到膠條中蛋白質(zhì)的分布。
⒍ 當所有的蛋白質(zhì)樣品都已經(jīng)加入到聚焦盤或水化盤中后,，用鑷子輕輕的去除預制IPG膠條上的保護層,。
⒎ 分清膠條的正負極，輕輕地將IPG膠條膠面朝下置于聚焦盤或水化盤中樣品溶液上,，使得膠條的正極（標有+）對應于聚焦盤的正極,。確保膠條與電極緊密接觸。不要使樣品溶液弄到膠條背面的塑料支撐膜上,，因為這些溶液不會被膠條吸收,。同樣還要注意不使膠條下面的溶液產(chǎn)生氣泡。如果已經(jīng)產(chǎn)生氣泡,，用鑷子輕輕地提起膠條的一端，上下移動膠條,，直到氣泡被趕到膠條以外,。
⒏ 在每根膠條上覆蓋2-3ml礦物油，防止膠條水化過程中液體的蒸發(fā),。需緩慢的加入礦物油,，沿著膠條，使礦物油一滴一滴慢慢加在塑料支撐膜上,。
⒐ 對好正,、負極，蓋上蓋子,。設(shè)置等電聚焦程序,。
⒑聚焦結(jié)束的膠條,。立即進行平衡、第二向SDS-PAGE電泳,，否則將膠條置于樣品水化盤中,，-20℃冰箱保存。
第二向SDS-PAGE電泳
⒈ 配制10%的丙烯酰胺凝膠兩塊,。配80ml凝膠溶液,，每塊凝膠40ml，將溶液分別注入玻璃板夾層中,，上部留1cm的空間,，用MilliQ水（沒有milliq的話ddh2o也行，注,，水云深浪按）,、乙醇或水飽和正丁醇封面，保持膠面平整,。聚合30分鐘,。一般凝膠與上方液體分層后，表明凝膠已基本聚合,。
⒉ 待凝膠凝固后,，倒去分離膠表面的MilliQ水、乙醇或水飽和正丁醇,，用MilliQ水沖洗,。
⒊ 從-20℃冰箱中取出的膠條，先于室溫放置10分鐘,，使其溶解,。
⒋ 配制膠條平衡緩沖液I。
5．在桌上先放置干的厚濾紙,，聚焦好的膠條膠面朝上放在干的厚濾紙上,。將另一份厚濾紙用MilliQ水浸濕，擠去多余水分,，然后直接置于膠條上,，輕輕吸干膠條上的礦物油及多余樣品。這可以減少凝膠染色時出現(xiàn)的縱條紋,。
⒍ 將膠條轉(zhuǎn)移至溶漲盤中,，每個槽一根膠條，在有膠條的槽中加入5ml膠條平衡緩沖液I,。將樣品水化盤放在水平搖床上緩慢搖晃15分鐘,。
⒎ 配制膠條平衡緩沖液Ⅱ。
⒏ *次平衡結(jié)束后，*倒掉或吸掉樣品水化盤中的膠條平衡緩沖液I,。并用濾紙吸取多余的平衡液（將膠條豎在濾紙上,，以免損失蛋白或損壞凝膠表面）。再加入膠條平衡緩沖液Ⅱ,，繼續(xù)在水平搖床上緩慢搖晃15分鐘,。
⒐ 用濾紙吸去SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝膠上方玻璃板間多余的液體。將處理好的第二向凝膠放在桌面上,，長玻璃板在下,，短玻璃板朝上，凝膠的頂部對著自己,。
⒑將瓊脂糖封膠液進行加熱溶解,。
⒒將10×電泳緩沖液，用量筒稀釋10倍,，成1×電泳緩沖液,。趕去緩沖液表面的氣泡。
⒓第二次平衡結(jié)束后,，*倒掉或吸掉樣品水化盤中的膠條平衡緩沖液Ⅱ,。并用濾紙吸取多余的平衡液（將膠條豎在濾紙上，以免損失蛋白或損壞凝膠表面）,。
⒔將IPG膠條從樣品水化盤中移出,，用鑷子夾住膠條的一端使膠面*浸末在1×電泳緩沖液中。然后將膠條膠面朝上放在凝膠的長玻璃板上,。其余膠條同樣操作,。
⒕將放有膠條的SDS-PAGE凝膠轉(zhuǎn)移到灌膠架上，短玻璃板一面對著自己,。在凝膠的上方加入低熔點瓊脂糖封膠液,。
⒖用鑷子、壓舌板或是平頭的針頭,，輕輕地將膠條向下推,，使之與聚丙烯酰胺凝膠膠面*接觸。注意不要在膠條下方產(chǎn)生任何氣泡,。在用鑷子,、壓舌板或平頭針頭推膠條時，要注意是推動凝膠背面的支撐膜,，不要碰到膠面。
⒗放置5分鐘,，使低熔點瓊脂糖封膠液*凝固,。
⒘在低熔點瓊脂糖封膠液*凝固后。將凝膠轉(zhuǎn)移至電泳槽中。
⒙在電泳槽加入電泳緩沖液后,，接通電源,，起始時用的低電流（5mA/gel/17cm）或低電壓，待樣品在*走出IPG膠條,，濃縮成一條線后,，再加大電流（或電壓）（20-30mA/gel/17cm），待溴酚藍指示劑達到底部邊緣時即可停止電泳,。
⒚電泳結(jié)束后,，輕輕撬開兩層玻璃，取出凝膠,，并切角以作記號（戴手套,，防止污染膠面）。
⒛進行染色,。
