1 制備色譜到底是什么?

(1)分析色譜的目的，是分析出混合物中一(或者幾個)純物質(zhì)的含量,。制備色譜的目的，是從混合物中得到純物質(zhì),。

為了加快分離的時間與提高分離的效率,，制備色譜的的進樣品量很大，導致制備色譜柱子的分離負荷的相應加大,，也就必須加大色譜柱填料,，增大制備色譜的直徑和長度，使用的相對多的流動相,。

然而,，當色譜柱上樣品負載加大的時候，往往導致柱效急劇下降而得不到純的產(chǎn)品,。制備色譜,，要解決容量與柱子效果之間的矛盾，對重現(xiàn)性也要考慮,。從經(jīng)濟上來說,。制備色譜要爭取少用填料，少用溶劑,，要盡可能多的得到產(chǎn)品,。

(2)樣品的前處理：

制備色譜柱子由于處理的樣品多，比分析柱子容易受污染,，所以,，必要的前處理就顯得非常的必要。萃取,、過濾,、結(jié)晶、固相萃取等簡單的分離方法,，如果用得上,，而且還不是很麻煩，就要盡可能多的采用以去掉雜質(zhì),。

(3)制備色譜柱的材質(zhì)及其特點

下面介紹一下,，制備色譜柱常用的材質(zhì)及其特點。

各種規(guī)格的玻璃柱子在實驗室里頭很容易得到,，而且價格低廉,，但玻璃柱子致命的弱點是它能承受的壓力很小，且非常容易破碎,。當由于壓力太小而導致流動相流速很慢的時候,，高位液面或加高壓空氣(或者氮氣)的采用是一個簡單的解決辦法,。在底下加真空，也能在一定程度上解決個問題,。

不銹鋼柱子具有良好的耐腐蝕,、抗壓力性能，但其價格相對很貴,。如果,，只有很小的分離任務且經(jīng)費也允許，市面上直徑為1cm的小型制備柱就是,。

有機玻璃柱子也能抗壓力耐腐蝕,，相對不銹鋼柱子而言，它是半透明的,，可以看到液體的運行狀態(tài),，對有色的物質(zhì)其特點就更為突出。

(4)固定相的選擇

硅膠,、鍵合固定相(如C18),、離子交換樹脂 、聚酰胺,、 氧化鋁,、 凝膠等都可以作為色譜柱的填料。 有不少文獻報道,，對填料可以進行一下處理提高了分離效果,，如，對硅膠進行的硝酸銀(或緩沖液)處理,。

(5)裝柱方法的選擇根據(jù)固定相顆粒度和柱子的尺寸,，采用不同的裝柱方法，往往裝填越好分離效果越好,。裝柱效果跟填料的顆粒度關(guān)系很大,，顆粒度的減少會導致裝柱的難度。一般來說,，顆粒直徑小于20-30um的固定相采用濕法裝填,。所謂“敲擊-裝填”技術(shù)適用于顆粒直徑大于25um的固定相。濕法的目的是迫使相對稀松的固定相懸漿以高速裝入色譜柱子,，從而減少空隙的形成,。然而，當柱直徑大于20mm,，所加壓力為30-40bar時,，高壓懸漿裝填技術(shù)就變得十分復雜。為將小顆粒固定相裝入更大得制備型色譜柱，可采用柱長壓縮技術(shù),。這種方法，先將固定相懸漿(或偶爾是干填充物)裝入柱中加壓,，利用物理方法將其壓緊,。壓緊的方法有兩種：徑向壓縮和軸向壓縮。 濕法裝柱需要一定的設備,，在柱子填完后,，應用有柱效的測量，對柱效低的柱子應該重填,。

(6)流動相的選擇

除了和分析色譜同樣的考慮外,，在選用流動相時，要考慮色譜分離后面加有旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)等二次分離操作,。一般來說,，不宜采用高毒性溶劑，對多元溶劑要盡可能的少用,。

如果產(chǎn)品中含有大量溶劑,，溶劑的純度也要考慮在其中。

(7)加樣的方法

可以采用以下方法之一進樣,。-用注射器進樣-用旋轉(zhuǎn)閥進樣-通過六通閥進樣-通過主泵進樣-通過輔泵進樣-固體上樣

(8) 泵的選用

生產(chǎn)制備色譜泵的廠商很多,。根據(jù)有無脈沖、能承受的zui大壓力,、控制的精度,、售后服務等來選擇泵。

(9)檢測器的選用

一般的分析池的zui大允許流速僅為5 mL/min 或者10mL/min,。而專門的制備池的zui大允許流速可為150mL/min,。有時，采用旁路分離管,，將少量流體導入分析池進行檢測,，是一個不錯的辦法，但其濃度的誤差會相對較大,。

(10)組分保留時間的估計

用分析柱子在同等色譜條件下(同樣的固定相和流動相)測定保留時間后,，按照單一組分的線流速(不是體積流速)一定，通過計算可以知道組分的大致保留時間區(qū)域,。

分析譜圖的峰形狀,，對確定保留時間也有很大的參考價值。

(11)產(chǎn)品的收集

手工餾分收集費時費力,，自動餾分收集器有很大的方便,。許多實驗室和工廠都采用了餾分收集器。

(12)超載、邊緣切割,、中心切割,、放大技術(shù)與非線性效用

在制備色譜中，因為沒有必要達到分析色譜那樣的分離度,，可以在一定范圍內(nèi)大大加大進樣的濃度和體積,。在做分離的時候，也有一些分析色譜的時候,，不能用到的技巧,。因為篇幅關(guān)系，不在這里敘述,。

(13)柱轉(zhuǎn)換技術(shù)

通過接頭或者閥門,，實現(xiàn)柱子的簡單延長，或者比較方便地實現(xiàn)對其中一個(或幾個)組分的精制,。

(14)比較新的制備色譜技術(shù)

模擬移動床可以連續(xù)進樣,，并可以利用邊緣切割效用，而且采用了柱切換技術(shù),，能更好的利用溶劑和填料,，已經(jīng)應用于工業(yè)化生產(chǎn)。其理論和技術(shù)也日益完善,。

迎頭色譜,、超臨界流體色譜、逆流色譜環(huán)形色譜,、氣相制備色譜等在科研和工業(yè)生產(chǎn)中也得到了應用,。