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液相色譜儀廠家介紹液相色譜法測發(fā)酵液中阿魏酸和香草酸,、醛
香草醛是食品,、飲料等工業(yè)應(yīng)用zui廣泛的香料之一,,還可作為保鮮劑及醫(yī)藥等工業(yè)的原材料,。香草醛目前主要由化學(xué)方法制備,但化學(xué)合成制得的香草醛不屬于天然香料,。生物轉(zhuǎn)化法生產(chǎn)香草醛多采用阿魏酸作為前體物質(zhì),,轉(zhuǎn)化過程中會產(chǎn)生香草酸等中間產(chǎn)物。
液相色譜儀廠家相關(guān)研究曾采用過薄層色譜法測定阿魏酸,、香草酸和香草醛,,但是此法定量欠準(zhǔn)確,層析時板與板之間重現(xiàn)性較差,。因此,,研究了能同時測定發(fā)酵或生物轉(zhuǎn)化液中阿魏酸、香草酸和香草醛的反相液相色譜法,,該方法的重現(xiàn)性好,,準(zhǔn)確、可靠,,可方便地檢測發(fā)酵進(jìn)程,。
實(shí)驗(yàn)儀器:液相色譜儀;微量進(jìn)樣器,,微膜過濾器,。
色譜條件:色譜柱 (250mm×4mmi.d.,5μm),,流動相為:A=0.01%冰醋酸水溶液,,B=甲醇;時間程序:開始時20%B,保持4min,,到24min時增加至40%,,到27min時增加至100%并保持2min,到30min時又降至20%,,并以這種比例使柱子平衡至少5min,;流速為1mL/min。檢測波長:280nm檢測,;進(jìn)樣量:25μL,;柱溫:室溫。
測定方法
1精密稱取阿魏酸,、香草酸,、香草醛標(biāo)樣各0.5g,用甲醇定容至50mL,,得到10g/L的標(biāo)準(zhǔn)貯備液,,再由貯備液配制一系列不同濃度的3種標(biāo)樣的混合溶液,用液相色譜儀進(jìn)行測定,,得出結(jié)果繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,。
2將發(fā)酵液或生物轉(zhuǎn)化液先用濾紙過濾,再加入適量的無水乙醇,,離心以除去蛋白質(zhì)等大分子雜質(zhì),,在除去雜質(zhì)的樣品中加入20%的甲醇后,再將其pH值調(diào)至5,,用0.22μm微濾膜過濾得濾液,。
3任意選取3個樣品,按上述實(shí)驗(yàn)方法處理后進(jìn)樣測定,。