土壤亞硝酸還原酶（Solid-Nitrite reductase,，S-NiR）試劑盒說明書

分光光度法 50 管/24 樣

正式測定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：

土壤亞硝酸還原酶是反硝化作用中的關(guān)鍵酶之一,，參與亞硝酸鹽至NO 的還原反應(yīng)，它的活性反映了生物降解過程中氮素的轉(zhuǎn)化效率,，為氮素轉(zhuǎn)化規(guī)律的研究提供一定的依據(jù),。

測定原理：

亞硝酸還原酶可將NO2—還原為NO，使樣品中參與重氮化反應(yīng)生成紫紅色化合物的 NO —減少,，即540nm 處吸光值的變化可反應(yīng)土壤中亞硝酸還原酶的活性,。

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試劑的組成和配制：

試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存,。臨用前加 10ml 蒸餾水溶解,。

試劑三：液體 10ml×1 瓶，4℃保存,。（如出現(xiàn)沉淀可以 70-80℃加熱溶解,；

試劑四：液體 25ml×1 瓶，4℃避光保存,。（如出現(xiàn)沉淀可以 70-80℃加熱溶解,；工作液：臨用前根據(jù)用量將試劑四和試劑五以 1:1 的比例混合。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

自備儀器和用品：

天平、可見分光光度計(jì),、水浴鍋,、低溫離心機(jī)、1ml 玻璃比色皿,。

樣品處理：

新鮮土樣自然風(fēng)干或 37 度烘箱風(fēng)干,，過 30~50 目篩。

測定操作表：

計(jì)算公式：

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 1.5562x+ 0.0088,，R² = 0.996；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μmol/ml）,，y 為吸光值（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）,。

酶活單位定義：每g 土樣每天還原 1μmol NO2ˉ 的量為一個(gè)酶活力單位。

S-NiR（μmol /d /g 土樣）=[A 空白管-(A 測定管-A 對照管) -0.0088] ×V 標(biāo)÷1.5562÷W÷T

= 3.084×[A 空白管-(A 測定管-A 對照管) -0.0088]÷W

T：反應(yīng)時(shí)間,，1h=1/24d,；V 標(biāo)：標(biāo)準(zhǔn)液體積，0.2ml,； W：樣本質(zhì)量,，g。

注意事項(xiàng)：

1. 配制好的工作液 3 天內(nèi)使用完,。

2. 若吸光值超過 3,，將上清液進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂尯笤偌尤牍ぷ饕猴@色，并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù),。

3. 嚴(yán)格控制顯色時(shí)間,，否則會對結(jié)果有影響。

4. 標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍為 0.03μmol/ml-1.5μmol/ml,。

5. A 空白管-（A 測定管-A 對照管）線性范圍為 0.02-3,。

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