土壤漆酶（Soil Laccase，SL）試劑盒說明書

分光光度法 50 管/24 樣

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

漆酶（Laccase）是一種含銅的多酚氧化酶,，屬于銅藍(lán)氧化酶家族,，廣泛分布于真菌和高等植物中，具有較強(qiáng)的氧化還原能力,，在紙漿生物漂白，環(huán)境污染物降解和木質(zhì)纖維素降解以及生物檢測(cè)方面有非常廣泛的應(yīng)用,。

測(cè)定原理：

漆酶分解底物ABTS 產(chǎn)生ABTS 自由基,，在 420nm 處的吸光系數(shù)遠(yuǎn)大于底物ABTS，測(cè)定 ABTS 自由基的增加速率,，可計(jì)算得漆酶活性,。

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試劑組成和配制：

工作液：粉劑×2 瓶，4℃避光保存,，臨用前每瓶加 25ml 試劑一溶解,。

自備儀器和用品：

天平、低溫離心機(jī),、可見分光光度計(jì),、1 ml 玻璃比色皿、震蕩儀,。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

樣品處理：

新鮮土樣風(fēng)干,，過 30-50 目篩。

測(cè)定步驟：

1,、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min,，調(diào)節(jié)波長到 420nm，蒸餾水調(diào)零,。

37℃震蕩反應(yīng) 10min,，冰浴 5min，10000g,，4℃離心 10min,，取出800μl 反應(yīng)液立即于 420nm 處測(cè)定吸光值，分別記為A1,，A2,。△A=A2-A1,。

酶活性計(jì)算公式：

酶活性定義：每克土壤每分鐘氧化 1nmol 底物ABTS 所需的酶量為一個(gè)酶活力單位（U）。

DA

SL 活性（nmol/min/g 土樣）=

e′ d ×V 反總÷W÷T= 2.78×△A÷W

ε：ABTS 毫摩爾消光系數(shù)：36L/mmol/cm,；d：比色皿光徑,，1cm；V 反總：反應(yīng)總體積,，1ml,； W：樣本質(zhì)量，g,；T：反應(yīng)時(shí)間,，10min

注意事項(xiàng):

1、工作液需臨用前配制,，并且盡快使用,，4℃保存一周，若變色則不能使用,。

2,、測(cè)定之前進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，若吸光值較高,，請(qǐng)將樣品用提取液進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂屧贉y(cè)定,，并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

3,、反應(yīng)完立即記錄數(shù)據(jù),，以免造成逆向反應(yīng)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

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