土壤酸性磷酸酶（soil acid phosphatase，S-ACP）活性測定試劑盒說明書

分光光度法 50 管/48 樣

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：

土壤磷酸酶是一類催化土壤有機磷礦化的酶,，其活性的高低直接影響著土壤中有機磷的分解轉(zhuǎn)化及其生物有效性,，是評價土壤磷素生物轉(zhuǎn)化方向與強度的指標(biāo)。土壤磷酸酶受到土壤碳,、氮含量,、有效磷含量和pH 顯著影響，根據(jù)最適 pH 范圍,，通常分為酸性,、中性和堿性三種類型。

測定原理：

酸性環(huán)境中,，S-ACP 催化磷酸苯二鈉水解生成ben酚和磷酸氫er鈉,，通過測定酚的生成量即可計算出S-ACP活性。

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試劑組成和配制：

試劑二：粉劑×1 瓶,，4℃保存,。用前加 50ml 蒸餾水充分溶解。

試劑四：粉劑×1 瓶,，4℃避光保存,。臨用前加 1152μl 無水乙醇（自備），48 μl 蒸餾水充分溶解,。（變褐色后不能再使用）,。

標(biāo)準(zhǔn)品：液體×1 瓶,，0.5 μmol/ml ben酚標(biāo)準(zhǔn)液，4℃保存,。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

自備儀器和用品：

可見分光光度計,、臺式離心機、37℃恒溫培養(yǎng)箱,、分析天平,、可調(diào)式移液器、1ml 玻璃比色皿,、冰,、蒸餾水、乙醇和甲苯,。

粗酶液提?。?/span>

稱取風(fēng)干混勻土壤約 0.1g，加入 50μl 甲苯（自備）,，輕搖 15min,；加 0.4 ml 試劑一并且搖勻后，置于37℃恒溫培養(yǎng)箱,，開始計時,，催化反應(yīng) 24h；到時后迅速加入 1ml 試劑二充分混勻,，以終止酶催化的反應(yīng),。8000g，25℃離心 10min,，取上清液置于冰上待測,。

測定步驟：

1. 分光光度計預(yù)熱 30 min，調(diào)節(jié)波長到 660 nm,，蒸餾水調(diào)零,。

2. 空白管：取 1ml 玻璃比色皿，加入 50 μl 蒸餾水,，100 μl 試劑三,，20 μl 試劑四，充分混勻,，顯色后再加蒸餾水 830 μl,，混勻后 25℃靜置 30 min，于 660 nm 測定吸光度,，記為A 空白管。

3. 標(biāo)準(zhǔn)管：取 1ml 玻璃比色皿,，加入 50 μl 標(biāo)準(zhǔn)液,，100 μl 試劑三,，20 μl 試劑四，充分混勻,，顯色后再加蒸餾水 830 μl,，混勻后 25℃靜置 30 min，于 660 nm 測定吸光度,，記為A 標(biāo)準(zhǔn)管,。

4. 測定管：取 1ml 玻璃比色皿，加入 50 μl 上清液,，100 μl 試劑三,，20 μl 試劑四，充分混勻,，顯色后再加蒸餾水 830 μl,，混勻后 25℃靜置 30 min，于 660 nm 測定吸光度,，記為A 測定管,。

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次。

S-ACP 活性計算公式：

活性單位定義：37℃中每克土壤每天釋放 1μmol 酚為 1 個酶活單位,。

S-ACP（μmol/d /g 土樣）=[C 標(biāo)準(zhǔn)液×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)]×V 總÷W÷T

=0.725×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)÷W

C 標(biāo)準(zhǔn)液：0.5 μ mol/ml,； V 總：催化體系總體積，1.45ml,；W：土壤樣品質(zhì)量,，g；T：催化反應(yīng)時間,，24 h=1 d,。

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