土壤谷an酰胺酶(solid-glutaminase, S- GLS) 活性測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)

分光光度法 50 管/48 樣

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

GLS（EC 3.5.1.2）存在于高等動(dòng)物和某些細(xì)菌以及植物根中,，催化谷an酰胺水解成谷an酸和氨，在氮素代謝中具有重要調(diào)控作用,，尤其是調(diào)節(jié)游離氨含量和尿素代謝,。

測(cè)定原理：

S-GLS 催化谷an酰胺水解成 L-谷an酸和氨，利用奈氏試劑檢測(cè)氨增加的速率,，即可計(jì)算其酶活性,。

土壤谷an酰胺酶活性測(cè)定試劑盒-常備現(xiàn)貨

試劑組成和配制：

自備儀器和用品：

臺(tái)式離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì),、1ml 玻璃比色皿,、可調(diào)式移液槍、研缽,、甲苯,、冰和雙蒸水。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)

測(cè)定步驟：

1,、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上,，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 420nm，蒸餾水調(diào)零,。

2,、樣品測(cè)定（在 EP 管中加入下列試劑）；

振蕩混勻,，室溫放置 15min,；

混勻，37℃水浴 2 小時(shí)

混勻，8000 g,，25℃離心 10 min,；取上清液，依次加入下列試劑

注意事項(xiàng):

混勻,，室溫靜置 15min,，420nm 處讀取測(cè)定管和對(duì)照管吸光值，計(jì)算ΔA=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管,。對(duì)照管只要做一管,。

試劑六如出現(xiàn)沉淀，靜置后取上清使用,。

酶活性計(jì)算：

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 3.8488x +0.0057,；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μmol/ml），y 為吸光值A,。單位定義：每 g 土樣每min 催化谷an酰胺生成 1nmol 氨定義為一個(gè)酶活力單位,。

S-GLS（nmol/min/g 土樣）=(ΔA-0.0057)÷3.8488×V 反總÷W÷T×1000

=2.27×(ΔA -0.0057)÷W。

V 反總：反應(yīng)體系總體積：1.05ml,；T：反應(yīng)時(shí)間,，2h=120min；W：樣本質(zhì)量,，g; 1000,，μmol 到nmol換算系數(shù),。

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