土壤亮an酸氨基肽酶（Solid-Leucine Aminopeptidase,S- LAP）試劑盒說明書

分光光度法 50 管/24 樣

正式測定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：

S-LAP 是一類能水解肽鏈 N-末端為亮an酸的酶,，由土壤微生物分泌,。S-LAP 活性變化與機(jī)體某些病理狀態(tài)密切相關(guān)。

測定原理：

S-LAP 分解L-亮an酰對(duì)硝基苯胺生成對(duì)硝基苯胺,，后者在 405nm 有最大吸收峰,，通過測定吸光值升高速率來計(jì)算S-LAP 活性。

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試劑的組成和配制：

自備儀器和用品：

可見分光光度計(jì),、臺(tái)式離心機(jī),、水浴鍋、可調(diào)式移液器,、1ml 玻璃比色皿和蒸餾水。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

S-LAP 測定步驟：

1,、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上,，調(diào)節(jié)波長至 405nm，蒸餾水調(diào)零,。

2,、在試劑二瓶中加入 30ml 試劑一充分溶解（如較難溶解，可 60℃水浴加熱約 30min 促進(jìn)溶解）,；用不完的試劑分裝后-20℃保存,，禁止反復(fù)凍融。

3,、操作表：

混勻,， 37℃振蕩反應(yīng) 1h 后，8000g 4℃離心 10min,，取 1ml 上清液于比色皿中,，405nm 處測定吸光值A,，計(jì)算ΔA=A 測定管-A 對(duì)照管。每個(gè)測定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管,。

S-LAP 活力單位的計(jì)算：

用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下

單位的定義：每天每 g 土樣每天生成 1 μmol 對(duì)硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位,。

S-LAP（μmol/d /g 土樣）＝ΔA×V 反總÷（ε×d）×106÷W÷T=14.8×ΔA

V 反總：反應(yīng)體系總體積，1.2×10-3 L,；ε：對(duì)硝基苯胺摩爾消光系數(shù),，9.72×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑,，1cm,；T：反應(yīng)時(shí)間，1h=1/24d,； W：樣本質(zhì)量,，0.2g。

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