Script III lncRNAcDNA Synthesis Kit（With dsDNase）

lncRNAcDNA 第一鏈合成試劑盒（去基因組）

lncRNA cDNA Synthesis Kit 反轉(zhuǎn)錄試劑

目錄號:71500

產(chǎn)品內(nèi)容

保存條件：-20℃保存,，有效期 12 個(gè)月。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

產(chǎn)品簡介

Script III lncRNA cDNA Synthesis Kit（With dsDNase）采用第三代高效逆轉(zhuǎn)錄酶,，具有更強(qiáng)的延伸能力和穩(wěn)定性,，并配備了具有DNA分解活性的特殊dsDNase，只需一步操作,， 即可同時(shí)完成基因組清除與逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng),，操作方便快捷。逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可以用于PCR,，克隆基因,；也可以用于qPCR,，兼容染料法和探針法，用來檢測高拷貝或低拷貝基因,。

lncRNA cDNA 第一鏈合成試劑盒是專門針對長鏈非編碼RNA（lncRNA）反轉(zhuǎn)錄而開發(fā)的產(chǎn)品。與 mRNA 相比,，lncRNA具有豐度低,、GC 含量差異大、二級結(jié)構(gòu)更復(fù)雜等特性,，傳統(tǒng)反轉(zhuǎn)錄試劑lncRNA 難以達(dá)到理想的效果,。本試劑盒含有高效去除基因組 DNA 的 dsDNase，可有效避免殘留的基因組DNA 對后續(xù)檢測結(jié)果的干擾,。本試劑盒中中使用的反轉(zhuǎn)錄酶是通過分子改造后的新型反轉(zhuǎn)錄酶,，具有更強(qiáng)的 RNA 親和性和熱穩(wěn)定性，使本試劑盒在通讀 GC 含量高,，二級結(jié)構(gòu)復(fù)雜,，低豐度的 RNA 模板和抗逆性等方面表現(xiàn)突出，特別適合表達(dá)水平相對較低,，二級結(jié)構(gòu)相對復(fù)雜的 lncRNA 的反轉(zhuǎn)錄反應(yīng),。

操作步驟：第一連cDNA合成 (以20 μl反應(yīng)體系為例)

1．反應(yīng)體系的配制

使用 RNase-Free PCR 管在冰上配制：(使用前，請將各組分輕彈混勻,，點(diǎn)甩離心收集至管底,，置冰上備用。)

2．輕柔吸打混勻,，點(diǎn)甩離心,，置 PCR 儀進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。

25℃孵育 10 min 后,，產(chǎn)物用于 PCR,，42℃孵育 30 min；產(chǎn)物用于 qPCR,，42℃孵育 15 min,。

注意：如果模板具有復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)或高 GC 區(qū)域，可以先只加 RNA 模板,、引物和 RNase free H2O,，混勻，65℃變性 5 min,，冰上冷卻,，點(diǎn)甩離心后加入其它成分，將 42℃孵育溫度提升至 50°C,，有助于提高產(chǎn)量,。

3． 85°C加熱 5 sec,，失活RTase和dsDNase，終止反應(yīng),。

逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可立即用于PCR或qPCR反應(yīng),，或保存于-20°C，并在半年內(nèi)使用,；長期存放建議分裝后在-70°C保存,，cDNA應(yīng)避免反復(fù)凍融。

PCR（建議取2 - 4 μl的cDNA產(chǎn)物原液作為PCR模板,。）

1. 常規(guī)擴(kuò)增： 71800-2x Lightning Taq PCR MasterMix (10sec/kb)

2. 高保真擴(kuò)增：71814-2×LongHiFi PCR MasterMix (≤10kb,，15sec/k)

qPCR（建議取1~2μl cDNA產(chǎn)物原液作為20μl qPCR反應(yīng)體系的模板。如果基因表達(dá)量較高,，可以根據(jù)實(shí)際情況適當(dāng)稀釋cDNA模板后使用,。）

lncRNA cDNA Synthesis Kit 反轉(zhuǎn)錄試劑