Script III RT MasterMix

( Perfect for qPCR )

Script III RT MasterMix 反轉(zhuǎn)錄試劑

目錄號:71518

產(chǎn)品內(nèi)容

保存條件

-20℃保存,，有效期 12 個(gè)月,。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

產(chǎn)品簡介

Script III RT MasterMix為一管式逆轉(zhuǎn)錄預(yù)混液,，含有逆轉(zhuǎn)錄所需的所有試劑：Script III Hˉ RTase、RNase Inhibitor,、Random primers,、OligodT Primer,、dNTP Mixture,、RT Buffer。

只需加入RNA模板和RNase-Free H2O,，15分鐘即可完成逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng),。 操作方便快捷，逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物兼容染料法和探針法qPCR，用于檢測高拷貝或者低拷貝基因,。

注意事項(xiàng)

1． 避免RNase污染,。

2． 為保證反轉(zhuǎn)錄成功，建議使用高質(zhì)量的RNA樣品,。

3． 5x RT MasterMix含有甘油比較粘稠,，容易吸附在管壁和吸頭外，導(dǎo)致?lián)p失,，使用前請點(diǎn)甩離心后取用,。5x RT MasterMix包含的酶過量，即使每次分別按照3.8 μl使用,，也不影響使用效果,。

4． 20 μl逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系建議加入不超過1μg的Total RNA。如果目的基因的表達(dá)量非常低,，最多加入5 μg Total RNA,，否則，RNA量過高,，可能會超出后續(xù)qPCR的線性范圍,。

5． 本產(chǎn)品適用于包含Ploy (A)結(jié)構(gòu)的真核生物mRNA和不包含Ploy (A)結(jié)構(gòu)的原核生物RNA、真核生物rRNA和tRNA等模板,，但不適用于miRNA等小RNA模板,。

6． 如果模板具有復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)或高GC區(qū)域，推薦使用變性步驟,，即在操作步驟之前,，將模板RNA在65℃孵育5 min后迅速轉(zhuǎn)移到冰上，再加RNA模板和RNase free H2O,，混勻,，50°C孵育15 min進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。

第一連 cDNA 合成 (以 20 μl 反應(yīng)體系為例)

重要提示：操作前,，請將各組分輕彈混勻,，點(diǎn)甩離心后置冰上備用。

1． 反應(yīng)體系的配制

于冰上,，在PCR管中,，加入以下組分：

2． 輕柔吸打混勻，42℃孵育15 min,，進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng),。

3． 85°C加熱5 sec，終止反應(yīng),。

逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可立即用于qPCR反應(yīng),，或保存于-20°C,，并在半年內(nèi)使用；長期存放,，請分裝后存于-70°C,。

qPCR

建議取1~2μl cDNA產(chǎn)物原液作為20μl qPCR反應(yīng)體系的模板。

如果基因表達(dá)量比較高,，請根據(jù)實(shí)際情況適當(dāng)稀釋cDNA模板后使用,。

相關(guān)產(chǎn)品：

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