Script III All-in-one RT Mix With dsDNase

（Perfect for qPCR）

All-in-oneRTMixwithdsDNase 反轉(zhuǎn)錄試劑

目錄號(hào):71710

產(chǎn)品內(nèi)容

保存條件

-20℃保存,，有效期 12 個(gè)月。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

Script III All-in-one RT Mix With dsDNase是Script III RT Kit WithgDNA Eraser的升級(jí)版,，只需一步操作,， 僅需15分鐘就可以同時(shí)完成基因組清除與逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng),，操作方便快捷，逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物兼容染料法和探針法qPCR,，用于檢測(cè)高拷貝或低拷貝基因,。

本品采用第三代高效逆轉(zhuǎn)錄酶和熱敏型dsDNase，針對(duì)qPCR進(jìn)行特別優(yōu)化oligo dT和N6隨機(jī)引物配比,，使cDNA合成可從RNA轉(zhuǎn)錄本的各個(gè)區(qū)域起始并具有相同的逆轉(zhuǎn)錄效率,，zui大程度保證了qPCR結(jié)果的真實(shí)性和可重復(fù)性。

其中5 x All-in-one RT Mix為一管式逆轉(zhuǎn)錄預(yù)混液,，含有逆轉(zhuǎn)錄所需的所有試劑（Script III Hˉ RTase,、RNase Inhibitor、Random primers,、OligodT Primer,、dNTP Mixture、RT Buffer）,。

注意事項(xiàng)

1． 避免 RNase 污染,。

2． 為保證逆轉(zhuǎn)錄成功，建議使用高質(zhì)量的 RNA 樣品,。

3． 20μl 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系建議加入不超過 1μg 的 Total RNA,。如果目的基因的表達(dá)量非常低，最多加入 5μg Total RNA,，否則,，RNA 量過高，可能會(huì)超出后續(xù) qPCR 的線性范圍

4． 本產(chǎn)品適用于包含 Ploy (A)結(jié)構(gòu)的真核生物 mRNA 和不包含 Ploy (A)結(jié)構(gòu)的原核生物RNA,、真核生物rRNA和tRNA等模板,，但不適用于miRNA等小 RNA 模板。

5． 5x All-in-one RT Mix 和 dsDNase 含有高濃度甘油,，比較粘稠,，容易吸附在管壁和吸頭外，導(dǎo)致?lián)p失,，用前請(qǐng)點(diǎn)甩離心后取用,。5x All-in-oneRT Mix 和 dsDNase 內(nèi)包含的酶過量，即使每次分別按照 3.8 μl,、0.9 μl使用,，也不影響使用效果。

6． 建議使用 0.2ml RNase-free PCR 管在冰上配制反應(yīng)液,，并用 PCR 擴(kuò)增儀精準(zhǔn)控溫,。

第一連 cDNA 合成 (以 20 μl 反應(yīng)體系為例)

重要提示：操作前，請(qǐng)將各組分輕彈混勻，點(diǎn)甩離心后置冰上備用,。

1． 反應(yīng)體系的配制

于冰上,，在PCR管中，加入以下組分：

用移液器輕輕吸打,，充分混勻,，點(diǎn)甩離心收集至管底。

2． 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)

① mRNA模板來源于真核細(xì)胞(植物,、動(dòng)物),，含有Poly(A)尾結(jié)構(gòu)：42℃孵育15min,；

② mRNA模板來源于原核細(xì)胞(細(xì)菌),、病毒，不含Poly(A)尾結(jié)構(gòu)：25℃孵育10min,；42℃孵育15 min,。

注意：如果模板具有復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)或高GC區(qū)域，設(shè)置反應(yīng)程序：

42°C孵育2 min（去除gDNA）,，50°C孵育15 min (逆轉(zhuǎn)錄),，有助于提高產(chǎn)量。

3． 終止反應(yīng)

85°C加熱5 sec,，失活RTase和gDNA Eraser,。

逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可立即用于qPCR反應(yīng)，或保存于-20°C,，并在半年內(nèi)使用,；長(zhǎng)期存放，請(qǐng)分裝后存于-70°C,。

qPCR

建議取1~2μl cDNA產(chǎn)物原液作為20μl qPCR反應(yīng)體系的模板,。如果基因表達(dá)量比較高,，請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況適當(dāng)稀釋cDNA模板后使用,。

相關(guān)產(chǎn)品：

71519 2x SYBR Green qPCR Mix (同TB Green Premix Ex Taq)

71600 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適用于所有qPCR儀)

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R452 高效植物總RNA提取試劑盒（根,、莖,、葉、花）

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