花青素還原酶（anthocyanidin reductase,，ANR）試劑盒說明書

微量法 100T/96S

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

花青素還原酶是黃酮合成途徑中的關(guān)鍵酶,，在植物體內(nèi)起非常重要的調(diào)控作用,，對(duì)花青素還原酶的調(diào)控機(jī)制研究有利于從基因水平改變植物的品質(zhì),。

測(cè)定原理：

花青素還原酶在 NADPH 存在的條件下作用于飛燕草色素轉(zhuǎn)變?yōu)楸頉]食子兒茶素和NADP,，使反應(yīng)體系在 340nm 處的吸光值下降，吸光值下降速率反應(yīng)了花青素還原酶的活性,。

花青素還原酶試劑盒 抗氧系列-常備現(xiàn)貨

組成：

試劑二：粉劑×1 瓶,，4℃避光保存。臨用前加 1ml 蒸餾水溶解,；用不完的試劑分裝后-20℃保存,，禁止反復(fù)凍融。

試劑三：粉劑×1 瓶,，4℃避光保存,。臨用前加 1ml 蒸餾水溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存,，禁止反復(fù)凍融,。

試劑四：粉劑×1 瓶，4℃避光保存,。臨用前加 1ml 蒸餾水溶解,；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融,。

自備儀器和用品：

天平,、研缽、低溫離心機(jī),、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀,、微量石英比色皿/96 孔板,、蒸餾水。

酶液提取:

1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織,，加入 1ml 提取液）,，進(jìn)行冰浴勻漿。10000g ,，4℃離心 10min,，取上清，置冰上待測(cè),。

2. 培養(yǎng)液等液體：直接檢測(cè),。

測(cè)定操作表：

充分混勻，于微量石英比色皿/96 孔板測(cè)定 340 處吸光值A1,，然后在 40℃溫育 20min 后,，再測(cè)定 340nm

處吸光值A2，△A=A1-A2

酶活性計(jì)算公式:

a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

（1） 按照蛋白濃度計(jì)算

酶活性定義：在 40℃,，pH6.5 條件下,，每毫克蛋白每分鐘催化 1nmolNADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。

ANR 活性（nmol/min/mg prot）= ΔA÷（ε×d）×V 反總÷(V 樣×Cpr) ÷T

= 80.39×ΔA÷Cpr

（2） 按照樣本質(zhì)量計(jì)算

酶活性定義：在 40℃,，pH6.5 條件下,，每克組織每分鐘催化 1nmolNADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。

ANR 活性（nmol/min/g 鮮重）= ΔA÷（ε×d）×V 反總÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T

= 80.39×ΔA÷W

（3） 按液體體積計(jì)算

酶活性定義：在 40℃,，pH6.5 條件下,，每毫升液體每分鐘催化 1nmolNADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。

ANR 活性（nmol/min/ml）= ΔA÷（ε×d）×V 反總÷V 樣÷T

= 80.39×ΔA

V 反總：反應(yīng)體系總體積,，0.2ml,；ε：NADH 摩爾消光系數(shù)，6.22×10³ L / mol /cm,；d：比色皿光徑,，1cm,； V 樣：加入樣本體積,，0.02ml；V 樣總：加入提取液體積,，1ml,；T：反應(yīng)時(shí)間，20min,；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/ml；W：樣本質(zhì)量,，g

b. 用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

（1） 按照蛋白濃度計(jì)算

酶活性定義：在 40℃,，pH6.5 條件下,，每毫克蛋白每分鐘催化 1nmolNADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。

ANR 活性（nmol/min/mg prot）= ΔA÷（ε×d）×V 反總÷(V 樣×Cpr) ÷T

= 160.78×ΔA÷Cpr

（2） 按照樣本質(zhì)量計(jì)算

酶活性定義：在 40℃,，pH6.5 條件下,，每克組織每分鐘催化 1nmolNADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。

ANR 活性（nmol/min/g 鮮重）= ΔA÷（ε×d）×V 反總÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T

= 160.78×ΔA÷W

（3） 按液體體積計(jì)算

酶活性定義：在 40℃,，pH6.5 條件下,，每毫升液體每分鐘催化 1nmolNADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。

ANR 活性（nmol/min/ml）= ΔA÷（ε×d）×V 反總÷V 樣÷T

= 160.78×ΔA

V 反總：反應(yīng)體系總體積,，0.2ml,；ε：NADH 摩爾消光系數(shù)，6.22×10³ L / mol /cm,；d：比色皿光徑,，0.5cm； V 樣：加入樣本體積,，0.02ml,；V 樣總：加入提取液體積，1ml,；T：反應(yīng)時(shí)間,，20min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/ml,；W：樣本質(zhì)量，g

花青素還原酶試劑盒 抗氧系列-常備現(xiàn)貨