二氫黃酮醇還原酶（Dihydro flavonol reductase,，DFR）試劑盒說明書

微量法 100T/48S

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：

二氫黃酮醇還原酶是類黃酮合成途徑中的一個關(guān)鍵酶，在決定植物的花色,、葉色,、果色和其他經(jīng)濟(jì)器官的色澤及其營養(yǎng)品質(zhì)方面起著重要作用。

測定原理：

二氫黃酮醇還原酶作用于二氫槲皮素產(chǎn)生兒茶素，可與香cao醛縮合形成紅色化合物,，在 500nm 處有特征吸收峰,。

二氫黃酮醇還原酶試劑盒 抗氧系列-常備現(xiàn)貨

組成：

試劑三：臨用前加 2ml 蒸餾水溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存,，禁止反復(fù)凍融,。

自備儀器和用品：

研缽、低溫離心機(jī),、震蕩儀,、氮吹儀、可見分光光度計/酶標(biāo)儀,、微量石英比色皿/96 孔板,、水浴鍋、無水乙醇,、乙酸乙酯,。

酶液提取:

組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液）,，進(jìn)行冰浴勻漿,。10000g ，4℃離心 10min,，取上清,，置冰上待測。

測定操作表：

1,、分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min,，調(diào)節(jié)波長至 500nm。

2,、操作表

計算公式:

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.0184x+0.0002,，R²=0.999

（1） 按照蛋白濃度計算

酶活性定義：在 30℃,，pH7.5 條件下,，每毫克蛋白每分鐘分解二氫槲皮素產(chǎn)生 1mmol 兒茶素所需的酶量為一個酶活力單位。

DFR 活性（mmol/min/mg prot）=（△A-0.0002）÷0.0184×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷T÷2

= 9.06×（△A-0.0002）÷Cpr

（2） 按照樣本質(zhì)量計算

酶活性定義：在 30℃，pH7.5 條件下,，每克組織每分鐘分解二氫槲皮素產(chǎn)生 1mmol 兒茶素所需的酶量為一個酶活力單位,。

DFR 活性（mmol/min/g 鮮重）= （△A-0.0002）÷0.0184×V 反總÷（V 樣×W÷V 樣總）÷T÷2

= 9.06×（△A-0.0002）÷W

V 反總：反應(yīng)總體積，1ml,；V 樣：反應(yīng)體系中樣本體積,，0.1ml；V 樣總：加入提取液體積,，1ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml,；W，樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時間，30min

b. 用 96 孔板測定的計算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.0092x+0.0002,，R²=0.999

（1） 按照蛋白濃度計算

酶活性定義：在 30℃，pH7.5 條件下,，每毫克蛋白每分鐘分解二氫槲皮素產(chǎn)生 1mmol 兒茶素所需的酶量為一個酶活力單位,。

DFR 活性（mmol/min/mg prot）=（△A-0.0002）÷0.0092×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷T÷2

= 9.06×（△A-0.0002）÷Cpr

（2） 按照樣本質(zhì)量計算

酶活性定義：在 30℃,，pH7.5 條件下,，每克組織每分鐘分解二氫槲皮素產(chǎn)生 1mmol 兒茶素所需的酶量為一個酶活力單位。

DFR 活性（mmol/min/g 鮮重）= （△A-0.0002）÷0.0092×V 反總÷（V 樣×W÷V 樣總）÷T÷2

= 9.06×（△A-0.0002）÷W

V 反總：反應(yīng)總體積,，1ml,；V 樣：反應(yīng)體系中樣本體積，0.1ml；V 樣總：加入提取液體積,，1ml,；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml,；W，樣本質(zhì)量,，g,；T：反應(yīng)時間，30min

二氫黃酮醇還原酶試劑盒 抗氧系列-常備現(xiàn)貨