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上海語純生物科技有限公司
初級會員·1年CC96403Y2HGold Chemically Competent Cell
| 參考價: | 面議 |
具體成交價以合同協(xié)議為準- CC96403 產(chǎn)品型號
- 語純生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問次數(shù)：59更新時間：2025-04-24 10:16:33
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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 10 ×100ul/100×100ul |
|---|---|---|---|
| 貨號 | CC96403 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥 |
產(chǎn)品貨號：CC96403
產(chǎn)品規(guī)格：10 ×100ul/100×100ul
本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或進一步生產(chǎn)使用，不可用于臨床診斷或治療,。
產(chǎn)品介紹
Y2HGold Chemically Competent Cell
產(chǎn)品簡介
Y2HGold 菌株是 Clontech 公司開發(fā)的 GAL4 系統(tǒng)酵母雙雜實驗用菌株,，MATa 型，可直接轉(zhuǎn)化質(zhì)粒
或與 MATα 型酵母菌株 Y187 通過 mating 操作進行蛋白互作驗證或篩庫試驗,。Transformation marker
為：trp1,，leu2，報告基因為： AbAr,，HIS3,，ADE2，MEL1,。Y2HGold-GAL4 酵母雙雜系統(tǒng)需要兩
種質(zhì)粒配套使用：pGBKT7 和 pGADT7,。質(zhì)粒 pGBKT7 的篩選標志為 TRP1，用于表達 DNA-BD (來
自酵母轉(zhuǎn)錄因子 GAL4N 端 1 ~ 174 位氨基酸)與目標蛋白 (Bait) 的融合蛋白,；質(zhì)粒 pGADT7 的篩選
標志為 LEU,，用于表達 AD(GAL4 C 端 768 ~ 881 位氨基酸)與目標蛋白 (Prey)的融合蛋白。GAL4 系
統(tǒng)原理：一個完整的酵母轉(zhuǎn)錄因子 GAL4 可分為功能上相互獨立的兩個結(jié)構(gòu)域：位于 N 端 1 ~ 174
位氨基酸區(qū)段的 DNA 結(jié)合域 (DNA-BD)和位于 C 端 768 ~ 881 位氨基酸區(qū)段的轉(zhuǎn)錄激活域 (AD),。
DNA-BD 能夠識別 GAL4-responsive gene 的上游激活序列 UAS,，并與之結(jié)合。而 AD 可以啟動 UAS
下游的基因進行轉(zhuǎn)錄,。BD 和 AD 單獨存在不能激活轉(zhuǎn)錄,，但當二者接近時，則呈現(xiàn)完整的 GAL4
活性,，使含有 UAS 的啟動子下游基因轉(zhuǎn)錄表達,。正常條件下，BD 不與 AD 結(jié)合,，將要檢測的蛋白
質(zhì)分別與 BD 和 AD 融合,，形成 bait 融合蛋白 (bait -BD)和 prey 融合 蛋白 (prey-AD)，如果 bait 和
prey 發(fā)生相互作用，就會促使 BD 和 AD 的相互接近,，形成完整的 GAL4,，從而激活報告基因的轉(zhuǎn)
錄。Y2HGold 有四個報告基因：AbAr,，HIS3,，ADE2，MEL1,，分別由三種不同的啟動子 (G1,，G2，
M1) 啟動,，這三種啟動子只有 GAL4 識別的 17 bp 核心區(qū)相同,，其余部分均不同，大大降低了酵母
雙雜假陽性發(fā)生的概率,。此外新報告基因 AbAr 與以前的營養(yǎng)缺陷報告基因相比具有更低背景的優(yōu)
點,，也可以降低酵母雙雜假陽性發(fā)生的概率。Y2HGold 感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作,，-80℃可保存
三個月,，pGADT7 質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率>104cfu/μg DNA。
產(chǎn)品組分
名稱
規(guī)格
儲存方式
Y2HGold Competent Cell
100 μl /支
-80℃（3 個月）
pGADT7 (control vector, 10 ng/μl)
10 μl
-80℃（12 個月）
Carrier DNA (10 μg/μl)
100 μl
-20℃（12 個月）
PEG/LiAC
5 ml
4℃（12 個月）
基因型：MATa, trp1-901, leu2-3, 112, ura3-52, his3-200, gal4Δ, gal80Δ, LYS2::GAL1UAS-Gal1TATA-His3,
GAL2UAS- Gal2TATA-Ade2 URA3::MEL1UAS-Mel1TATA AUR1-C MEL1
使用方法：
1. 從-80℃取出 Y2HGold 感受態(tài)細胞,，置于冰上融化,，依次加入預(yù)冷的目的質(zhì)粒 2-5 µg，Carrier
DNA (95-100℃,，5 min,，快 速冰浴，重復(fù)一次) 10 µl,，PEG/LiAc 500 µl ,，吸打混勻，30℃水浴 30
min (15 min 時翻轉(zhuǎn) 6 - 8 次混勻),。
32. 42℃水浴 15 min (7.5 min 時翻轉(zhuǎn) 6 - 8 次混勻),。
3. 5000 rpm 離心 40 s 棄上清，ddH2O 400 µl 重懸,，離心 30 s 棄上清,。
4. ddH2O 50 µl 重懸，涂板,，29℃培養(yǎng) 48 - 96 h。
● 培養(yǎng)基配制
① YPDA (1L): Tryptone 20 g ,，Yeast extract 10 g ,，0.2% adenine 15 ml 補水到 950 ml，用鹽酸調(diào) pH
到 6.5； Agar 20 g(for plates only) 121℃,，15 min 高壓滅菌,； 待培養(yǎng)基溫度降到 55℃時，加入已過
濾的 40% 葡萄糖 50 ml,。
② SD medium (1L): Yeast Nitrogen base 6.7 g ,，葡萄糖 20 g ，Dropout 適量（按說明書） 補水到 1L,，
調(diào) pH 至 5.8,； Agar 20 g(for plates only) 121℃，15 min 高壓滅菌,。
③ 0.2% adenine (1L): Adenine 2 g,,，補水到 1 L；溶解后高壓滅菌或 0.22 µm 濾膜過濾除菌,。
注意事項
1. 感受態(tài)細胞最好在冰上融化,。
2. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量,。
3. 同時轉(zhuǎn)化 2 - 3 種質(zhì)粒時可增加質(zhì)粒的用量,。
4. Y2HGold 酵母菌株對高溫敏感，最適生長溫度為 27 - 30℃,；高于 31℃,，生長速度和轉(zhuǎn)化效率呈
指數(shù)下降。
5. 菌落變粉不是污染,，是酵母細胞生長中一個常見現(xiàn)象,。當細胞在平板培養(yǎng)幾天后，平板上的
Adenine 被酵母消耗完畢,，酵母試圖通過自身代謝途徑合成 Adenine 以供利用,，然而，有些菌株的
ADE2 基因被破壞,，Adenine 合成途徑受阻,；又由于其 ADE4,5,6,7,8 基因均正常，所以造成中間產(chǎn)物
P-ribosylamino imidazole (AIR) 在細胞中積累而使菌落變?yōu)榉奂t色,。
6. 酵母在缺陷培養(yǎng)基中生長速度比 YPDA 培養(yǎng)基慢,，培養(yǎng)基中缺陷成分越多，生長越慢,，以轉(zhuǎn)化涂
板為例：涂 YPDA 平板 29℃,，48 h 培養(yǎng)可見直徑 1 mm 克隆,；涂 SD 單缺平板 29℃,，48 - 60 h 培養(yǎng)
可見直徑 1 mm 克隆，涂 SD 雙缺平 板 29℃，60 - 80 h 培養(yǎng)可見直徑 1 mm 克隆,，涂 SD 三缺或四缺
平板平板 29℃,，80 - 90h 培養(yǎng)可見直徑 1 mm 克隆。
Y2HGold Chemically Competent Cell
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