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初級(jí)會(huì)員·1年EC96193DH10B plus電轉(zhuǎn)克隆感受態(tài)
| 參考價(jià): | 面議 |
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)- EC96193 產(chǎn)品型號(hào)
- 語(yǔ)純生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問(wèn)次數(shù)：45更新時(shí)間：2025-04-21 11:27:13
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 10 ×50ul/100×50ul |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | EC96193 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥 |
產(chǎn)品貨號(hào)：EC96193
產(chǎn)品規(guī)格：10 ×50ul/100×50ul
本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或進(jìn)一步生產(chǎn)使用，不可用于臨床診斷或治療,。
產(chǎn)品介紹
DH10B plus電轉(zhuǎn)克隆感受態(tài)
DH10B-Plus 感受態(tài)細(xì)胞用電擊法轉(zhuǎn)化的效率較高,，故不推薦使用熱激法化學(xué)轉(zhuǎn)化。DH10B-Plus 菌
株來(lái)源于 DH10B 菌株,，在 DH10B 菌株中引入 Hte 突變,，提高了細(xì)胞膜的通透性和對(duì)瞬時(shí)高壓的耐
受進(jìn)而提高了電擊轉(zhuǎn)化效率,。DH10B-Plus 菌株適合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的 DNA
(無(wú)論真核生物還是原核生物的基因組 DNA 都能被高效的轉(zhuǎn)入 DH10B-Plus 中)。recA1 和 endA1 的
突變有利于插入 DNA 的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒 DNA 的提取,， lacZΔM15 標(biāo)記的存在使 DH10B-Plus 可
用于藍(lán)白斑篩選,。DH10B-Plus 電擊感受態(tài)細(xì)胞具有鏈霉素和四環(huán)素抗性，適用于大質(zhì)粒的構(gòu)建或
各種文庫(kù)構(gòu)建,，經(jīng)特殊工藝處理,，pUC18 質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率可達(dá) 1010 cfu/μg DNA。
產(chǎn)品組成
組分
DH10B-plus 感受態(tài)細(xì)胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型：F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara, leu)7697
galE15 galK λ- rpsL nupG Hte (TetR)
存儲(chǔ)條件
-80 ℃保存,；請(qǐng)勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質(zhì)量控制
無(wú)外源質(zhì)粒 DNA 殘留,；
化學(xué)法轉(zhuǎn)化效率≥1010 cfu/μg pUC18 DNA,。
使用方法
1. 將感受態(tài)細(xì)胞從-80 ℃中取出，置于冰水浴中融化,；
2. 將待轉(zhuǎn)化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細(xì)胞中,，輕輕彈勻，轉(zhuǎn)入冰上預(yù)冷的電擊轉(zhuǎn)化杯中,；
3. 使用電轉(zhuǎn)儀進(jìn)行電擊轉(zhuǎn)化（轉(zhuǎn)化參數(shù)為：2mm 電擊杯,，2.5kv，200Ω,，電轉(zhuǎn)化時(shí)間一般為 4-5 ms
左右）,；
4. 電擊后迅速取出電擊杯，向其中加入 900 μL 液體 LB 或 SOC 培養(yǎng)基（室溫或 37 ℃預(yù)熱）,，然后
置于 37 ℃搖床復(fù)壯 45 min,；
5. 取不同體積的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，用無(wú)菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上,，于 37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過(guò)夜,。
注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞冰上解凍后應(yīng)立即使用；
2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 不應(yīng)含有較高的離子強(qiáng)度,，建議總體積不超過(guò) 5 μl,，一般為 1-2 μl；
3. 為確保最高轉(zhuǎn)化效率,，電轉(zhuǎn)化杯一定要在冰上預(yù)冷,；
4. 如使用 1 mm 電擊杯，則轉(zhuǎn)化參數(shù)改為 1.25 kv 和 200 Ω,。
DH10B plus電轉(zhuǎn)克隆感受態(tài)
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