多重免疫組化檢測(cè)實(shí)驗(yàn)步驟：

1．包埋好的標(biāo)本用石蠟切片機(jī)切片3um

2．經(jīng)60℃烘片1小時(shí)

3．二甲苯Ⅰ脫蠟10分鐘

4．二甲苯Ⅱ脫蠟10分鐘

5．梯度酒精復(fù)水：100%酒精5分鐘，100%酒精5分鐘,，95%酒精5分鐘,，80%酒精5分鐘，自來(lái)水沖洗 5分鐘

6．進(jìn)行抗原修復(fù)：將切片置于0.1mol/L且ph=6.0的枸櫞酸液修復(fù)液中,，沸水浴20分鐘,，停止加熱后自然冷卻20-30分鐘

7. 用PBS 3分鐘3次，組畫筆畫圈,，滴加雙氧水,，孵育20min

8． 用PBS 3分鐘3次，滴加封閉血清封閉1h

9．甩干 ,，滴加適宜濃度的一抗置濕盒中4℃孵育過(guò)夜

10．用PBS 3分鐘×5次洗去一抗

11．甩干,，滴加二抗室溫置孵育盒中孵育1小時(shí)（注意二抗種屬，夏季30min，冬季1h）

12．用PBS 3分鐘×5次洗去二抗

13．甩干,，滴加DAB 顯色,，水沖

14．蘇木素染核5min (新配置的蘇木素視情況而定)

15.流水沖洗多余的蘇木素，分化液中分化1秒

16.流水沖洗5min

17.梯度酒精復(fù)水：80%酒精5分鐘,，95%酒精5分鐘,，100%酒精5分鐘，100%酒精5分鐘,，二甲苯Ⅱ透明5min,，二甲苯Ⅰ透明5min（如為全透明，可適當(dāng)延長(zhǎng)時(shí)間）

18.用中性樹膠封片

19.鏡檢