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蘋果中酵母菌的分離
喆圖小編今天來說說酵母菌，酵母菌是一些單細胞真菌,，并非系統(tǒng)演化分類的單元,。酵母菌是人類文明史中被應用得早的微生物
大多數(shù)酵母菌的菌落特征與細菌相似，但比細菌菌落大而厚,，菌落表面光滑,、濕潤、粘稠,，容易挑起,，菌落質(zhì)地均勻，正反面和邊緣,、中央部位的顏色都很均一,，菌落多為乳白色，少數(shù)為紅色,，個別為黑色,。未發(fā)現(xiàn)其有性階段的酵母菌稱假酵母。
大多數(shù)酵母菌為腐生,，其生活適pH為4.5-6,，常見于含糖分較高的環(huán)境中，例如果園土,、菜地土及果皮等植物表面,。酵母菌生長迅速，易于分離培養(yǎng),，在液體培養(yǎng)基中,，酵母菌比霉菌生長得快。
利用酵母菌喜歡酸性環(huán)境的特點,，常用酸性液體培養(yǎng)基培養(yǎng)獲得酵母菌的培養(yǎng)液（這樣做的好處是酸性培養(yǎng)條件則可抑制細菌的生長）,，然后在固體培養(yǎng)基上劃線分離之。
酵母菌細胞的死活可用美藍進行區(qū)別,。原因是美藍為弱氧化劑,，無毒，且還原后變?yōu)闊o色。如果是活的酵母細胞,，由于新陳代謝不斷進行,，細胞內(nèi)氧化還原電勢頗低，還原力強,，若有美藍染料進入活的酵母細胞內(nèi),，即被還原成無色，而死的細胞或代謝緩慢的衰老,，由于它們無還原能力或還原能力弱,，仍可被美藍染成藍色或淺藍色。
將少量酵母菌接種到一定體積的,、適合的新鮮培養(yǎng)基中,，在適宜的條件下進行培養(yǎng)，定時測定培養(yǎng)液中的菌量,，以菌量的對數(shù)作縱坐標,，生長時間作橫坐標，繪制的曲線叫生長曲線,，它反映了單細胞微生物在一定環(huán)境條件下于液體培養(yǎng)時所表現(xiàn)的群體生長規(guī)律,。依據(jù)其生長速率的不同，一般可把生長曲線分為延緩期,、對數(shù)期,、穩(wěn)定期和衰亡期。這四個時期的長短因菌種的遺傳性,、接種量和培養(yǎng)條件的不同而有所改變,。因此通過測定微生物的生長曲線,，可了解各菌的生長規(guī)律,，對于科研和生產(chǎn)都具有很重要的指導意義。
實驗材料與培養(yǎng)基制備
1,，蘋果,、梨等、0.1%美藍染液,、1ml的吸管,、無菌培養(yǎng)皿、試管,、高壓鍋,、恒溫培振蕩養(yǎng)箱等。
2,，馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA培養(yǎng)基）,；
原料：馬鈴薯（80g）、葡萄糖（8g）、瓊脂（4g）,、蒸餾水（400ml）,。
配制方法：
（1） 先將馬鈴薯去皮，切片,，稱80克并加蒸餾水400ml,，煮沸半小時， 用紗布過濾,，補足蒸餾水量至400ml,，制成20%的馬鈴薯汁。
（2） 在200ml20%的馬鈴薯汁中加入4g瓊脂,，4g葡萄糖,，煮沸熔化， 補足水分并在115℃條件下高壓滅菌20分鐘,。制備馬鈴薯葡萄糖瓊脂平板,。
3，豆芽汁液體培養(yǎng)基：稱取黃豆芽50g,，加水100ml,，煮沸1h，過濾后 補足水分,，121℃濕熱滅菌后存放備用,，此即為50%的豆芽汁。取50%豆芽汁200ml,，葡萄糖50g,，水800ml，自然pH,，在115℃條件下高壓滅菌20min,。
4，YPD培養(yǎng)基：配方：1%酵母膏,，2%蛋白胨,，2%葡萄糖。 配制方法（1000ml配方）：溶解10g酵母膏,，20g蛋白胨于900ml水中,， 121℃20min高壓滅菌。同時將20g葡萄糖加入100ml水中,，121℃20min高壓滅菌,。然后在超凈臺中兩者混合。
注：葡萄溶液和酵母膏,、蛋白胨溶液混合后在高溫下可能會發(fā)生化學反 應,，導致培養(yǎng)成分變化,，所以要分別滅菌后在混合，但要注意無菌操作,。
實驗步驟
1,、接種：取一小塊果皮，不需沖洗,，直接接入豆芽汁液體培養(yǎng)基試管 中,，置28-30℃，培養(yǎng)24h,，可見培養(yǎng)液變渾濁,。
2、培養(yǎng),，用無菌吸管取上述培養(yǎng)后培養(yǎng)液0.1ml,，注入另一管豆芽汁 液體培養(yǎng)基中，置28-30℃再培養(yǎng)24h或稍長（過長則霉菌長出）,。
3,、觀察：用無菌操作法取少許菌液置于載玻片中央的0.1%美藍染液中， 混勻后加蓋玻片制成水浸片,，先用低倍鏡后換用高倍鏡觀察酵母菌的形態(tài)和出芽生殖情況,。 活酵母可使美藍還原，從而使菌體不著色,，用此方法可判斷酵母菌的死 活,。
4、分離：馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基溶化后制成平板,。用劃線法分離酵 母培養(yǎng)液,，從而得到單個菌落。
5,、生長曲線測定：挑取單個菌落接種于30mlYPD液體培養(yǎng)基中,，30℃、 180r/min振蕩培養(yǎng)24h,，取擴大培養(yǎng)的菌液的菌液按照1:100的接種量接種于3瓶50mlYPD培養(yǎng)液中,，同樣條件下振蕩培養(yǎng),，并分別于培養(yǎng)后2,、4、6,、8,、10、12,、14,、16、18、20,、22,、24、26,、28,、30h取菌種培養(yǎng)懸液5ml，以未接種的酵母YPD液體培養(yǎng)基校正7200型紫外可見分光光度計的零點,，在波長600nm處比色測定菌液OD600值,。以各時間點菌液的吸光光度值（OD600）為縱坐標，以培養(yǎng)時間為橫坐標,，繪制出酵母工程的生長曲線,。
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