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糖化酶的制備
糖化酶又稱葡萄糖淀粉酶,，其作用方式不像α-淀粉酶那樣無作用次序,而是從底物鏈的非還原性末端開始,順次切下一個個葡萄糖單位,遇到分支處的α-1,6糖苷鍵時,可將α-1,6糖苷鍵切開,然后繼續(xù)作用α-1,4糖苷鍵,直到產(chǎn)物全部成為葡萄糖為止。但糖化酶對α-1,6糖苷鍵的作用速度遠不及對α-1,4糖苷鍵的作用速度,，因此水解支鏈淀粉多的淀粉時,，需延長水解作用時間或添加部分支鏈淀粉酶。
我國糖化酶的生產(chǎn)主要由黑曲霉優(yōu)良菌種經(jīng)深層發(fā)酵精制提煉而成,。本實驗利用黑曲霉具有多種活力較強酶系的特點,，利用淀粉類物質為原料，獲得制備淀粉水解糖所需的糖化酶,。
一,、實驗材料
1. 菌種：黑曲霉（Aspergillus niger）
2. 儀器：潔凈工作臺、滅菌鍋,、恒溫培養(yǎng)箱,、高速冷凍離心機、高壓滅菌鍋
二,、實驗步驟
實驗流程：保藏菌種®菌株活化及平板擴大培養(yǎng)®搖瓶培養(yǎng)
1.菌株活化及擴大培養(yǎng)
①制備PDA培養(yǎng)基：去皮馬鈴薯200g切成小塊,，加水約500mL，煮沸30min,，然后用紗布過濾,，濾液加蔗糖20g，瓊脂20g,。溶化后加水定容至1000mL,，分裝于250ml錐形瓶中，121℃滅菌20min,，自然pH,。
②接種：取滅菌后PDA培養(yǎng)基倒平板，冷卻后,，接種斜面保藏的黑曲霉菌種,，28℃恒溫培養(yǎng)3d。
2.搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)
①發(fā)酵培養(yǎng)基的制備：
玉米粉培養(yǎng)基：玉米粉30g,米糠5g,麩皮5g,加水1000ml,拌勻至無干粉又無結團,，分裝于250 ml錐形瓶內,，每瓶100ml, 自然pH,，121℃滅菌20 min。
②接種與產(chǎn)酶培養(yǎng):取培養(yǎng)72h的黑曲霉平板,，用打孔器打孔制成菌片,。每個錐形瓶中接種12片，放在恒溫培養(yǎng)箱中28℃培養(yǎng)96 h,。
3.離心
將搖床培養(yǎng)4d的黑曲霉發(fā)酵液4層紗布過濾后離心（10000r/min,，10min）除菌體，所得上清液即為糖化酶粗酶液,。