1. 最新檢測(cè)方法
酶可以結(jié)合在一抗上,,也可以結(jié)合在二抗上,還可以使用鏈霉親和素標(biāo)記的酶與親和素標(biāo)記的一抗結(jié)合,。此外小鼠ELISA試劑盒結(jié)果檢測(cè)還
包括放射性檢測(cè),、熒光檢測(cè)、化學(xué)發(fā)光或顯色法檢測(cè)等,。如今檢測(cè)ELISA有許多途徑,,我們可以根據(jù)自己的偏好進(jìn)行選擇,。
一般ELISA檢測(cè)的是酶促反應(yīng)的可溶性產(chǎn)物,,抗體上結(jié)合有相應(yīng)的酶(例如通常使用的辣根過(guò)氧化物酶HRP)
,,而反應(yīng)體系中添加有相應(yīng)的底物(如3,,3-二氨基聯(lián)苯胺DAB),。這種酶促反應(yīng)生成具有特征性的顏色,,可以通過(guò)分光光度計(jì)進(jìn)行檢測(cè),,
堿性磷酸酶AP也是一種常用酶。
2. 分析抗體最新類(lèi)型
單克隆抗體和多克隆抗體都能夠用于ELISA試劑盒,,實(shí)際上有時(shí)候二者結(jié)合效果更好。例如,,對(duì)于雙抗夾心法而言,用多抗進(jìn)行捕獲而單抗
進(jìn)行檢測(cè)有時(shí)更有幫助,。多抗能夠確保捕獲所有抗原,隨后單抗再特異性檢測(cè)擁有特定抗原表位的抗原,。
3. 交叉產(chǎn)生的反應(yīng)
如果抗體間發(fā)生沖突或交叉反應(yīng)就會(huì)影響整個(gè)實(shí)驗(yàn)的特異性。其中抗體來(lái)源所帶來(lái)的兼容性就是交叉反應(yīng)的一個(gè)因素,。
在用雙抗夾心法進(jìn)行ELISA檢測(cè)時(shí),檢測(cè)用的二抗必須特異性針對(duì)檢測(cè)一抗,,而不能與捕獲抗體起反應(yīng)。如果檢測(cè)用二抗與捕獲抗體結(jié)合,,
實(shí)驗(yàn)特異性就會(huì)大打折扣,。通常我們選用源自不同宿主的捕獲抗體和檢測(cè)一抗,,來(lái)避免上述問(wèn)題。
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