豬瘟病毒阻斷ELISA 抗體檢測試劑盒使用說明書
【產(chǎn)品名稱】
通用名：豬瘟病毒阻斷ELISA 抗體檢測試劑盒
英文名：Blocking ELISA Kit For Detection of Antibodies to Classical Swine Fever Virus
【包裝規(guī)格】 96T×1/盒,、96T×2/盒、96T×5/盒
【預期用途】 豬瘟是由豬瘟病毒（Classical Swine Fever Virus,，CSFV）引起的豬的一種高度接觸性,、出血性和致死性傳染病，其特征為高熱稽留和微血管壁變性而引起的廣泛出血,、壞死、梗塞等,，慢性以纖維素壞死性腸炎為特征,。
本試劑用于檢測豬血清中豬瘟病毒抗體,，可用于豬瘟病毒疫苗免疫效果評價,。
【試劑盒組成】
序號 | 名稱 | 規(guī)格/96T×1 | 規(guī)格/96T×2 | 規(guī)格/96T×5 |
1 | 酶標記物 | 11ml×1(紅蓋) | 11ml×2(紅蓋) | 26ml×2(紅蓋) |
2 | 樣品稀釋液 | 25ml×1(黃蓋) | 50ml×1(黃蓋) | 125ml×1(透明) |
3 | 20X濃縮洗滌液 | 40ml×1(白蓋) | 40ml×1(白蓋) | 200ml×1(透明) |
4 | 底物顯色液 | 10ml×1(黑蓋) | 10ml×2(棕蓋) | 25ml×2(黑蓋) |
5 | 終止液 | 5ml×1(黃蓋) | 10ml×1(黃蓋) | 25ml×1(黃蓋) |
6 | 陽性對照 | 1.0 ml×1(紅蓋) | 1.5 ml×1(紅蓋) | 2.0 ml×1(紅蓋) |
7 | 陰性對照 | 1.0 ml×1(綠蓋) | 1.5 ml×1(綠蓋) | 2.0 ml×1(綠蓋) |
8 | 酶標板 | 96T×1 | 96T×2 | 96T×5 |
9 | 蓋板膜 | 1 | 2 | 5 |
10 | 自封袋 | 1 | 1 | 2 |
11 | 說明書 | 1 | 1 | 1 |
12 | 稀釋板 | 1 | 2 | 5 |
【儲存及有效期】 2～8℃保存，有效期12個月,。
包被板開封后請于2～8℃避光保存,，避免受潮,。使用期限為2個月。
【適用儀器】 含630nm波長的酶標儀,，37℃恒溫設備,，可調(diào)微量移液器。
【樣品準備】
1.取動物全血,，待血液凝固后,，以4000r/min 離心10分鐘，收集血清,；或待血液凝固后自然析出血清,，再收集血清。血清應清亮,，無溶血,。
2.用樣品稀釋液將待檢血清按1:1稀釋（如100μl血清加入100μl樣品稀釋液中，混勻）,。陰,、陽性對照不用稀釋。
3.濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫使沉淀溶解,，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水+1份濃縮洗滌液),，如果發(fā)現(xiàn)有結晶加熱使其溶解后再使用。
溫馨提示：先使用血清稀釋板稀釋完所有的待檢血清,、再將稀釋好的血清轉(zhuǎn)移到抗原包被板上,，使反應時間一致。
【檢驗方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,，恢復至室溫,。
2.取所需用量酶標板條，設陰性,、陽性對照各2孔,，未用的板條盡快密封，2～8℃保存,，每孔加入工作洗滌液 300μl,，無需靜置，甩掉板孔中的洗滌液,，重復洗滌2次,，最后一次拍干。
3.陰,、陽性對照孔分別加入陰,、陽性對照100μl；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl,。
4.混勻,，蓋好蓋板膜,，置37℃（推薦水浴）避光反應2小時,。
5.甩去孔內(nèi)液體,，每孔加300μl工作洗滌液，無需靜置,，甩掉板孔中的洗滌液,，重復洗滌5次，最后一次拍干,。
6.每孔加酶標記物100μl,，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應30分鐘,。
7.洗滌,，同步驟5。
8.每孔加入底物顯色液100μl,，置室溫( 20～25℃)避光反應10分鐘,。
9.每孔加入終止液50μl，混勻,，10分鐘內(nèi)于630nm測定各孔吸光值,。
【參考值】 實驗正常的情況下，陰性對照的平均OD值即ODNC應≥0.6,，陽性對照的平均OD值即ODPC應≤0.5,。
【檢驗結果的判定】
1.PI（阻斷率）=（1- 陰性對照平均A值）×100%。
2.PI≥40%為陽性,；PI<40%為陰性,。
3.本實驗結果為陰性時表明豬只抗體水平不足，建議補打相應疫苗,。
【試驗方法的局限性】
該試驗僅作為定性檢測豬血清,、血漿中病毒抗體，根據(jù)PI值高低可作抗體水平強,、中,、弱的粗略評估。
【注意事項】
1.實驗操作時需戴手套,、穿工作衣，嚴格健全和執(zhí)行消毒隔離制度,，各種實驗廢棄物都應按傳染物處理,。
2.終止液具有腐蝕性，應避免接觸皮膚和衣物,，如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗,。
3.若試劑盒陰陽性對照,、酶標記物出現(xiàn)少量懸浮物，屬于正?，F(xiàn)象,。
4.酶標板從冷藏環(huán)境中取出時應恢復至室溫方可開袋，未用完的酶標板需放入有干燥劑的密封袋中保存,。
5.濃縮洗滌液在低溫時容易結晶,，使用時需恢復至室溫以溶解。
6.洗滌時各孔均需加滿液體,，防止孔口有游離酶不能洗凈,。
7.用于檢測的樣品應保持新鮮。
8.試驗結果的判定必須以酶標儀讀數(shù)為準,。
9.不同批號試劑組分不得混用,。
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