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CCK-8試劑盒是一種基于WST-8的試劑盒,，用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速,、高靈敏度檢測等，具有使用方便,，檢測快速，靈敏度高,，重復(fù)性優(yōu)于MTT法,，毒性小，適合于高通量藥物篩選等大規(guī)模實驗應(yīng)用的優(yōu)點,。以下是使用CCK-8試劑盒進行細(xì)胞增殖檢測的步驟：

一,、細(xì)胞增殖分析

1.培養(yǎng)細(xì)胞并將其接種到96孔板中。

2.在37℃,、5% CO2,、90%濕度條件下培養(yǎng)24小時。

3.配制不同濃度梯度的樣本溶液,，如300,、100、33.3,、11.1,、3.7,、1.2、0.4,、0.14uM,。

4.每個濃度三個復(fù)孔加入到96孔板中，在37℃,、5% CO2,、90%濕度條件下培養(yǎng)適當(dāng)時間長度。如6,，12,，24或48小時。

5.在CCK-8試劑盒中加入10μL的CCK-8溶液,。

6.在37℃,、5% CO2、90%濕度條件下培養(yǎng)0.5-4小時,。

7.用酶標(biāo)儀在450 nm處測量吸光度,。

8.用Excel及Graphpad Prism處理并分析結(jié)果。

二,、細(xì)胞毒性分析

1. 制備細(xì)胞懸液：細(xì)胞計數(shù)

2. 接種到96孔板中：根據(jù)合適的鋪板細(xì)胞數(shù),，每孔約100ul細(xì)胞懸液，同樣的樣本可做3個重復(fù),。

3. 37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)：細(xì)胞接種后貼壁大約需要培養(yǎng)2-4小時,，如果不需要貼壁，這步可以省去,。

4. 加入不同濃度的毒性物質(zhì)

5. 37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)：加入毒性物質(zhì)的培養(yǎng)時間,，要看毒性物質(zhì)的性質(zhì)和細(xì)胞的敏感性，一般要根據(jù)細(xì)胞周期來決定,，起碼要一代以上的時間,。

6. 加入10ulCCK8：由于每孔加入CCK8量比較少，有可能因試劑沾在孔壁上而帶來誤差,，建議在加完試劑后輕輕敲擊培養(yǎng)板以幫助混勻,。

7. 培養(yǎng)1-4小時:細(xì)胞種類不同，形成的Formazan的量也不一樣,。如果顯色不夠的話,，可以繼續(xù)培養(yǎng)，以確認(rèn)最佳條件,。特別是血液細(xì)胞形成的Formazan很少,，需要較長的顯色時間（5-6小時）。

8. 測定450nm吸光度：建議采用雙波長進行測定，檢測波長450-490nm,，參比波長600-650nm,。

本期內(nèi)容：CCK-8試劑盒進行細(xì)胞增殖檢測的步驟是怎樣的？

下期內(nèi)容：直擴pcr技術(shù)的使用場景及常見問題