直擴/直接PCR——Direct PCR,，一種不需要額外提取DNA就能夠實現(xiàn)體外DNA擴增的技術,，省去提取基因組DNA的繁瑣程序，可以直接應用于PCR的快速檢測,。直擴PCR最早應用的領域是動植物領域,，比如鼠、貓,、雞,、兔、羊,、牛等動物的血液,、組織和毛發(fā)；植物的葉片和種子等,，用來研究基因分型,、轉基因、質粒檢測,、基因敲除分析,、DNA來源鑒定、物種鑒定,、SNP分析等領域,。
這些領域有一些共同的特點，那就是目標基因的含量比較高,，核酸提取麻煩,，所以直擴PCR不僅能夠節(jié)省時間，對結果的影響很小,，同時也能節(jié)省成本,。本文就一起來了解一下直擴PCR技術的使用場景及常見問題。
在做分子實驗時，什么情況下建議使用直擴PCR而不是常規(guī)PCR呢,？
1.只需要提取樣品基因組DNA進行PCR,、分子克隆等實驗，不需要長期保存DNA,。如基因型鑒定,、CRISPR-Cas9陽性鑒定等；
2.樣品量較大時,，做PCR鑒定需要保存陽性樣本基因組DNA,，也可使用Direct PCR進行樣本初步篩選，有利于節(jié)約時間,、成本,；
3.樣本量較少，無法使用基因組提取試劑盒提取的樣品也可嘗試此方法,。
直擴PCR常見問題與解決辦法
Q1：擴增無目的條帶,？
A1：
1） 樣品
a．裂解樣品過多。建議按照說明書取樣進行裂解,；
b．樣品中抑制成分濃度過高,。釋樣品后再取適量作為模板。
2） 引物
a．引物設計不合理,；
b．引物降解,；
建議用提取的DNA樣品作為對照，用試劑盒陽性引物對照進行試驗,，重新設計引物,。
3） 程序：
a．PCR擴增程序不合適。調整PCR程序（優(yōu)化退火溫度：使用降落PCR,，梯度PCR,，增加循環(huán)數(shù)至35~40個循環(huán)、延伸時間增加等）,。
Q2：擴增出現(xiàn)非特異條帶,？
A2：
1） 引物：
a．引物設計不合理,。重新設計引物（從引物5’端延長引物至25~30bp,，Tm值65~67℃）；
b．引物濃度過高,。降低引物濃度,。
2）樣品
a．裂解樣品過多。建議按照說明書取樣進行裂解,；
b．樣品中抑制成分濃度過高,。釋樣品后再取適量作為模板。
3） 程序：
a．退火。優(yōu)化退火溫度,，使用降落PCR,，梯度PCR；
b．延伸,。減少延伸時間,；
c．循環(huán)數(shù)。降低循環(huán)數(shù),。
本期內容：直擴PCR技術的使用場景及常見問題
下期內容：polyscience轉染試劑介紹
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