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酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定ELISA實(shí)驗(yàn)類(lèi)型有哪些,？有三種必需的試劑：已知的抗原或抗體（用于結(jié)合到固相載體上）；酶標(biāo)的抗體或抗原（標(biāo)記物）,；顯色劑（用于顯色）,。

常見(jiàn)的ELISA實(shí)驗(yàn)有四種：直接ELISA,、間接ELISA,、夾心ELISA和競(jìng)爭(zhēng)ELISA。

直接ELISA法是將樣品中的抗原或抗體以非特異性方式直接吸附在包被板上,，然后將特異性測(cè)定抗體或抗原加入到孔中,，洗滌后加入底物顯色。相較于其它類(lèi)型的ELISA實(shí)驗(yàn),，直接ELISA實(shí)驗(yàn)步驟少,，檢測(cè)速度快，不需要用到二抗,，避免了交叉反應(yīng),，測(cè)定結(jié)果不容易出錯(cuò)。但是由于直接ELISA的抗原不是特異性固定的,，樣本中的所有蛋白質(zhì)（靶蛋白及其他雜質(zhì)蛋白）都會(huì)與ELISA板結(jié)合,，實(shí)驗(yàn)背景會(huì)比較高。而且直接ELISA每種靶蛋白都需要準(zhǔn)備能夠與其特異性結(jié)合的一抗，實(shí)驗(yàn)不太靈活,。另外由于沒(méi)有使用二抗,，信號(hào)沒(méi)有被放大，降低了測(cè)定的靈敏度,。一般對(duì)抗原的免疫反應(yīng)進(jìn)行分析時(shí),，常會(huì)使用直接ELISA。

間接ELISA法主要用于抗體的檢測(cè),，先將抗原結(jié)合到ELISA板上,，隨后分兩步進(jìn)行檢測(cè)：首先加入檢測(cè)抗體與抗原特異性結(jié)合，隨后加入酶標(biāo)二抗檢測(cè)并利用底物顯色,。與直接ELISA相比,，間接ELISA用到酶標(biāo)二抗，具有更高的靈敏度,，也需要更少的標(biāo)記抗體,，更經(jīng)濟(jì)。間接ELISA還提供了更大的靈活性,，因?yàn)椴煌囊豢鼓軌蚺c單一標(biāo)記的二抗一同使用,。間接ELISA實(shí)驗(yàn)的缺點(diǎn)是存在交叉反應(yīng)的可能性（酶標(biāo)二抗直接與抗原結(jié)合），可能會(huì)增加背景,，同時(shí)與直接ELISA相比,，間接ELISA實(shí)驗(yàn)多了二抗孵育的步驟，實(shí)驗(yàn)周期增長(zhǎng),。間接ELISA法適合測(cè)定樣品中總抗體的濃度,。

夾心ELISA實(shí)驗(yàn)需要用到配對(duì)抗體（捕獲抗體和檢測(cè)抗體），其實(shí)驗(yàn)原理是將捕獲抗體結(jié)合到ELISA板上,，通過(guò)捕獲抗體固定抗原,，隨后通過(guò)直接ELISA或間接ELISA的方式進(jìn)行檢測(cè)。在夾心ELISA實(shí)驗(yàn)中,，最重要的是對(duì)配對(duì)抗體進(jìn)行驗(yàn)證,，確保配對(duì)抗體能同時(shí)與抗原結(jié)合，以確保實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行,。

競(jìng)爭(zhēng)ELISA,，先將特異性抗體包被于固相載體表面，經(jīng)洗滌后分成兩組：一組加酶標(biāo)記抗原和被測(cè)抗原的混合液,，另一組只加酶標(biāo)記抗原,，經(jīng)孵育洗滌后加底物顯色，這兩組底物降解量之差,，即為所要測(cè)定的未知抗原的量,。此方法測(cè)定的抗原只要有一個(gè)結(jié)合部位即可，對(duì)小分子抗原如激素和藥物類(lèi)的測(cè)定常用此法。優(yōu)點(diǎn)是快,，缺點(diǎn)是需要較多量的酶標(biāo)記抗原,。在競(jìng)爭(zhēng)ELISA實(shí)驗(yàn)中，樣品中的抗原或抗體競(jìng)爭(zhēng)性的結(jié)合特定數(shù)量的酶標(biāo)抗體或抗原,。樣品中抗原濃度越高,，輸出信號(hào)越弱，信號(hào)輸出與樣品中抗原的量成反比,。

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