酶聯(lián)免疫吸附測定ELISA實驗類型有哪些,？有三種必需的試劑：已知的抗原或抗體（用于結(jié)合到固相載體上）,；酶標的抗體或抗原（標記物）；顯色劑（用于顯色）,。
常見的ELISA實驗有四種：直接ELISA,、間接ELISA、夾心ELISA和競爭ELISA,。
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直接ELISA (Direct ELISA)
直接ELISA法是將樣品中的抗原或抗體以非特異性方式直接吸附在包被板上,，然后將特異性測定抗體或抗原加入到孔中,，洗滌后加入底物顯色。相較于其它類型的ELISA實驗,，直接ELISA實驗步驟少,，檢測速度快，不需要用到二抗,，避免了交叉反應(yīng),，測定結(jié)果不容易出錯。但是由于直接ELISA的抗原不是特異性固定的,，樣本中的所有蛋白質(zhì)（靶蛋白及其他雜質(zhì)蛋白）都會與ELISA板結(jié)合，實驗背景會比較高,。而且直接ELISA每種靶蛋白都需要準備能夠與其特異性結(jié)合的一抗,，實驗不太靈活。另外由于沒有使用二抗,，信號沒有被放大,，降低了測定的靈敏度。一般對抗原的免疫反應(yīng)進行分析時,，常會使用直接ELISA,。
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間接ELISA (Indirect ELISA)
間接ELISA法主要用于抗體的檢測，先將抗原結(jié)合到ELISA板上,，隨后分兩步進行檢測：首先加入檢測抗體與抗原特異性結(jié)合,，隨后加入酶標二抗檢測并利用底物顯色。與直接ELISA相比,，間接ELISA用到酶標二抗,，具有更高的靈敏度，也需要更少的標記抗體,，更經(jīng)濟,。間接ELISA還提供了更大的靈活性，因為不同的一抗能夠與單一標記的二抗一同使用,。間接ELISA實驗的缺點是存在交叉反應(yīng)的可能性（酶標二抗直接與抗原結(jié)合）,，可能會增加背景，同時與直接ELISA相比,，間接ELISA實驗多了二抗孵育的步驟,，實驗周期增長。間接ELISA法適合測定樣品中總抗體的濃度,。
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夾心ELISA (Sandwich ELISA)
夾心ELISA實驗需要用到配對抗體（捕獲抗體和檢測抗體）,，其實驗原理是將捕獲抗體結(jié)合到ELISA板上，通過捕獲抗體固定抗原,，隨后通過直接ELISA或間接ELISA的方式進行檢測,。在夾心ELISA實驗中,，最重要的是對配對抗體進行驗證，確保配對抗體能同時與抗原結(jié)合,，以確保實驗的順利進行,。
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競爭ELISA (Competition ELISA)
競爭ELISA，先將特異性抗體包被于固相載體表面,，經(jīng)洗滌后分成兩組：一組加酶標記抗原和被測抗原的混合液,，另一組只加酶標記抗原，經(jīng)孵育洗滌后加底物顯色,，這兩組底物降解量之差,，即為所要測定的未知抗原的量。此方法測定的抗原只要有一個結(jié)合部位即可,，對小分子抗原如激素和藥物類的測定常用此法,。優(yōu)點是快，缺點是需要較多量的酶標記抗原,。在競爭ELISA實驗中,，樣品中的抗原或抗體競爭性的結(jié)合特定數(shù)量的酶標抗體或抗原。樣品中抗原濃度越高,，輸出信號越弱,，信號輸出與樣品中抗原的量成反比。
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下期內(nèi)容：CCK-8試劑盒進行細胞增殖檢測的步驟是怎樣的,？
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