Elisa作為經(jīng)典的免疫檢測方法,，看起來很平常,，然而真正做好它并不容易。睿創(chuàng)生物專注科研試劑盒的研發(fā)及銷售多年,，涉及分子生物學,、細胞生物學、免疫學等生命科學的各個領(lǐng)域,，滿足您實驗所需,，以實現(xiàn)與客戶的雙贏，完善的庫存及供應(yīng)體系以及高效穩(wěn)定的專業(yè)技術(shù),，保證產(chǎn)品均能現(xiàn)貨供應(yīng),。有哪些方法可以借鑒呢?睿創(chuàng)技術(shù)人員總結(jié)了以下幾點：

1、確定您的樣本類型和試劑盒可以兼容

    常見樣本類型有血清,，血漿,，細胞培養(yǎng)上清，如果是廠家實驗驗證過的,，可根據(jù)產(chǎn)品說明購買使用,。注意：血漿制備用到的抗凝劑有EDTA,、檸檬酸鹽、肝素等多種,，相應(yīng)的血漿性質(zhì)存在差異,，需單獨確認兼容性

2、試劑盒檢測范圍需要匹配樣本中標志物濃度

    elisa試劑盒的定量檢測范圍需參考標準曲線,，在標準曲線和濃度區(qū)間內(nèi)屬于線性范圍,，其中的值是可信和可定量的。濃度高于線性范圍的樣品要稀釋到線性范圍內(nèi)來測量,，而濃度低于線性范圍的樣品,，其測量值不能用于計算濃度，只能用做參考,。有一種常見的相關(guān)情況是：健康人樣本中很多標志物的濃度偏低,，測量值低于標準曲線值。

3,、樣本收集有講究

    以血清為例,，樣本收集可參考試劑盒說明書，但需注意以下要點,。樣本盡量用無菌管收集,，避免細菌的酶類和代謝產(chǎn)品對結(jié)果的影響。采集過程要避免溶血,，因為紅細胞溶解釋放的活性物質(zhì)可能會影響檢測。保存過程中如有沉淀,，應(yīng)離心后取上清液,。樣本若不立即測定，建議按照每次使用量分裝保存在-20℃,，每次檢測使用一管,，即避免交叉污染和反復(fù)凍融，又能保證檢測結(jié)果的平行可比性,。

4,、實驗前要準備好相應(yīng)試劑

    提前將所有試劑平衡到室溫環(huán)境，這個過程大致需半小時左右,。洗液是濃縮液,，如有結(jié)晶析出，需溶解后再進行稀釋,。A,、B兩管顯色底物在使用前15分鐘按1:1配成混合液。為保證蛋白標準品溶液配制質(zhì)量,，蛋白標準品為凍干粉,，重溶前需將管子離心,，加入說明書緩沖液，慢速在搖床上搖勻或顛倒混勻,，至少15分鐘,，不建議用槍頭吹打。溶解后如需保存,，按每次使用量分裝后根據(jù)說明書要求的溫度保存,。梯度稀釋蛋白標準品時，建議用聚丙烯管(對蛋白吸附力很低),，每步都要充分混勻且更換新槍頭,，確保梯度準確性。

5,、儀器設(shè)備的準備

    相關(guān)設(shè)備包括移液器,、洗板機/搖床和酶標儀。移液器的準確性對于ELISA實驗結(jié)果的可靠性十分關(guān)鍵,，需要確保定期校準維護,。搖床的使用是為了讓反應(yīng)體系快速達到平衡，獲得穩(wěn)定,、可重復(fù)的結(jié)果,。不用搖床對實驗通常的影響是，OD值低,，CV大,。酶標儀等設(shè)備使用前提前15分鐘開機預(yù)熱。

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