Elisa作為經(jīng)典的免疫檢測方法,，看起來很平常，然而真正做好它并不容易,。睿創(chuàng)生物專注科研試劑盒的研發(fā)及銷售多年,，涉及分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué),、免疫學(xué)等生命科學(xué)的各個領(lǐng)域,，滿足您實驗所需，以實現(xiàn)與客戶的雙贏,，完善的庫存及供應(yīng)體系以及高效穩(wěn)定的專業(yè)技術(shù),，保證產(chǎn)品均能現(xiàn)貨供應(yīng)。有哪些方法可以借鑒呢?睿創(chuàng)技術(shù)人員總結(jié)了以下幾點：

1,、確定您的樣本類型和試劑盒可以兼容

    常見樣本類型有血清,，血漿，細(xì)胞培養(yǎng)上清,，如果是廠家實驗驗證過的,，可根據(jù)產(chǎn)品說明購買使用。注意：血漿制備用到的抗凝劑有EDTA,、檸檬酸鹽,、肝素等多種，相應(yīng)的血漿性質(zhì)存在差異,，需單獨確認(rèn)兼容性

2,、試劑盒檢測范圍需要匹配樣本中標(biāo)志物濃度

    elisa試劑盒的定量檢測范圍需參考標(biāo)準(zhǔn)曲線，在標(biāo)準(zhǔn)曲線和濃度區(qū)間內(nèi)屬于線性范圍，其中的值是可信和可定量的,。濃度高于線性范圍的樣品要稀釋到線性范圍內(nèi)來測量,，而濃度低于線性范圍的樣品，其測量值不能用于計算濃度,，只能用做參考,。有一種常見的相關(guān)情況是：健康人樣本中很多標(biāo)志物的濃度偏低,，測量值低于標(biāo)準(zhǔn)曲線值,。

3、樣本收集有講究

    以血清為例,，樣本收集可參考試劑盒說明書,，但需注意以下要點。樣本盡量用無菌管收集,，避免細(xì)菌的酶類和代謝產(chǎn)品對結(jié)果的影響,。采集過程要避免溶血，因為紅細(xì)胞溶解釋放的活性物質(zhì)可能會影響檢測,。保存過程中如有沉淀,，應(yīng)離心后取上清液。樣本若不立即測定,，建議按照每次使用量分裝保存在-20℃,，每次檢測使用一管，即避免交叉污染和反復(fù)凍融,，又能保證檢測結(jié)果的平行可比性,。

4、實驗前要準(zhǔn)備好相應(yīng)試劑

    提前將所有試劑平衡到室溫環(huán)境,，這個過程大致需半小時左右,。洗液是濃縮液，如有結(jié)晶析出,，需溶解后再進(jìn)行稀釋,。A、B兩管顯色底物在使用前15分鐘按1:1配成混合液,。為保證蛋白標(biāo)準(zhǔn)品溶液配制質(zhì)量,，蛋白標(biāo)準(zhǔn)品為凍干粉，重溶前需將管子離心,，加入說明書緩沖液,，慢速在搖床上搖勻或顛倒混勻，至少15分鐘,，不建議用槍頭吹打,。溶解后如需保存，按每次使用量分裝后根據(jù)說明書要求的溫度保存。梯度稀釋蛋白標(biāo)準(zhǔn)品時,，建議用聚丙烯管(對蛋白吸附力很低),，每步都要充分混勻且更換新槍頭，確保梯度準(zhǔn)確性,。

5,、儀器設(shè)備的準(zhǔn)備

    相關(guān)設(shè)備包括移液器、洗板機(jī)/搖床和酶標(biāo)儀,。移液器的準(zhǔn)確性對于ELISA實驗結(jié)果的可靠性十分關(guān)鍵,，需要確保定期校準(zhǔn)維護(hù)。搖床的使用是為了讓反應(yīng)體系快速達(dá)到平衡,，獲得穩(wěn)定,、可重復(fù)的結(jié)果。不用搖床對實驗通常的影響是,，OD值低,，CV大。酶標(biāo)儀等設(shè)備使用前提前15分鐘開機(jī)預(yù)熱,。

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