首頁 >> 公司動(dòng)態(tài) >> 【直播回顧】電鏡大尺度成像公開課（生殖醫(yī)學(xué)篇）
體電鏡vEM技術(shù)近年因《Nature》的點(diǎn)名備受關(guān)注,，因其正重新定義生命科學(xué)研究的尺度邊界,。傳統(tǒng)電子顯微鏡雖具備納米級(jí)分辨率，但數(shù)據(jù)多為二維結(jié)構(gòu),。vEM通過連續(xù)片層掃描與三維重構(gòu)算法的結(jié)合,，實(shí)現(xiàn)了對(duì)生物樣本從亞細(xì)胞級(jí)到組織級(jí)的跨尺度成像。
針對(duì)本課題，本次網(wǎng)絡(luò)研討會(huì),，賽默飛邀請(qǐng)來自廣州醫(yī)科大學(xué)的陳浩教授,，分享其研究利用體電鏡技術(shù)（volume electron microscopy, vEM），在哺乳動(dòng)物附睪上皮細(xì)胞和小腸上皮細(xì)胞間發(fā)現(xiàn)并命名了一種新型細(xì)胞器儲(chǔ)存結(jié)構(gòu)—細(xì)胞間細(xì)胞器儲(chǔ)存庫（Intercellular Organelle Reservoirs, IORs）,，揭示了其在細(xì)胞器周轉(zhuǎn)和回收過程中的重要作用,。
會(huì)議內(nèi)容干貨十足，現(xiàn)場(chǎng)討論也非常熱烈,，特此加推回顧篇,，可以給到遺憾未能參加現(xiàn)在直播研討會(huì)的學(xué)者們回顧會(huì)議內(nèi)容的機(jī)會(huì)。
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Q&A集錦
1個(gè)細(xì)胞10um,老師的數(shù)據(jù)組織塊是11um,13um左右,，所以是想盡量還原單層細(xì)胞,，然后進(jìn)行重構(gòu)？是不是理解成控制在單層細(xì)胞水平進(jìn)行重構(gòu),？
是的,，主要是控制在單層細(xì)胞進(jìn)行重構(gòu)。10um便能看到一個(gè)相對(duì)完整的細(xì)胞,。
好奇是如何具體定義IOR中各種結(jié)構(gòu)的,，電鏡上主要通過形態(tài)嘛？
是的,，在電鏡的成像上能非常清楚的看到各個(gè)細(xì)胞細(xì)胞器的形態(tài),。比如能很清楚的看到蛋白聚集體，溶酶體,，像自噬小體也能能清楚辨認(rèn)的,。
這個(gè)IOR區(qū)域，在精子成熟過程中,，有沒有實(shí)質(zhì)性作用,？
推測(cè)是有作用的。IOR分布在三維結(jié)構(gòu)側(cè)面,，本身的結(jié)構(gòu)對(duì)精子應(yīng)該不是直接影響,，推測(cè)會(huì)間接影響。我們目前在Rab27a小鼠上發(fā)現(xiàn),，如果沒有Rab27a,，會(huì)發(fā)現(xiàn)側(cè)面IOR泡狀結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)減少，精子活力下降,，生育力也降低,。故此說明IOR泡狀結(jié)構(gòu)會(huì)影響上皮細(xì)胞功能，最后影響到管腔里面精子的功能,。
IOR的外圍是膜結(jié)構(gòu),，在體電鏡觀察中,，有沒有觀察到它與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)-質(zhì)膜，存在接觸位點(diǎn),，或者膜通道,？
IOR外圍的膜，是生物自己的細(xì)胞膜,。我們?cè)隗w電鏡的結(jié)果下觀測(cè)到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)確實(shí)和細(xì)胞膜,，以及線粒體有一定交互。但是由于試驗(yàn)過程中沒有很好的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)marker去標(biāo)示,，所以在本次結(jié)果中,，我們沒有將它標(biāo)記出來。
請(qǐng)問是否有desmosomes deficiency小鼠,，這些小鼠不能形成IOR嗎,？
我們沒有嘗試desmosome小鼠，但是猜測(cè)可能需要做條件敲除,？因?yàn)閐esmosome在胚胎發(fā)育過程中很重要,，初步猜測(cè)如果desmosome形成不了的話，這個(gè)IOR區(qū)域可能是沒有的,。在我們的研究中,，IS段的IOR，可見形態(tài)有別于其他附睪區(qū)段,，呈現(xiàn)長(zhǎng)泡狀或者管段狀,。猜測(cè)是由于IS里的desmosome分布和表達(dá)很少，后面幾個(gè)區(qū)段的desmosome分布和表達(dá)較多的緣故,。
請(qǐng)問老師這個(gè)研究中整體實(shí)驗(yàn)工作流程您覺得最困難的是樣品制備或是電鏡成像和后續(xù)分析,？
在本次實(shí)驗(yàn)中，最限速的步驟是重構(gòu)這一步,，因?yàn)樵谧鲞@個(gè)研究的時(shí)候,，還沒有AI輔助的功能,，只能依靠學(xué)生手動(dòng)挑選,。特別是針對(duì)細(xì)胞膜的重構(gòu)，即便現(xiàn)在有了AI輔助,，但是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜對(duì)細(xì)胞膜在重構(gòu)上的影響很大,，相對(duì)困難。樣品制備不難,，數(shù)據(jù)收集需要一定技巧,，也不難。其實(shí)是很多時(shí)間花在后期數(shù)據(jù)重構(gòu)上,。
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