蛋白質(zhì)測(cè)序的原理和步驟檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹

dànbáizhì作為生命活動(dòng)的直接參與者，其種類,、豐度和翻譯后修飾狀態(tài)直接決定細(xì)胞的功能表現(xiàn),。與DNA測(cè)序側(cè)重于“潛在編碼信息"不同，dànbáizhì測(cè)序致力于揭示“實(shí)際表達(dá)與功能狀態(tài)",。通過(guò)jīngquè測(cè)定dànbáizhì序列與修飾信息,，研究人員能夠全面理解細(xì)胞行為、疾病機(jī)制和藥物響應(yīng)過(guò)程,。在dànbáizhì測(cè)序中,，質(zhì)譜（Mass Spectrometry, MS）技術(shù)扮演著核心角色,，特別是液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）方法，已成為當(dāng)前主流的蛋白測(cè)序平臺(tái),。

一,、dànbáizhì測(cè)序的基本原理

dànbáizhì測(cè)序的核心是通過(guò)質(zhì)譜測(cè)定多肽片段的質(zhì)量和碎裂模式，從而推斷其氨基酸序列,。測(cè)序流程通常包括以下關(guān)鍵原理：

1,、酶切生成多肽

使用yídànbáiméi等蛋白酶將目標(biāo)蛋白切割為穩(wěn)定、可解析的多肽段,。

2,、色譜分離

將復(fù)雜的多肽混合物通過(guò)高效液相色譜（LC）分離，提高檢測(cè)分辨率,。

3,、質(zhì)譜分析

進(jìn)入質(zhì)譜儀后，首先通過(guò)一級(jí)MS（MS1）測(cè)定肽段的質(zhì)量,，然后選定特定肽段進(jìn)行二級(jí)碎裂（MS2）分析其氨基酸序列特征,。

4、數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)

將獲得的碎裂譜圖與蛋白數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行匹配,，從而鑒定肽段與對(duì)應(yīng)蛋白,。

通過(guò)對(duì)全樣本的肽段頻率、強(qiáng)度,、修飾等數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì),，可進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)dànbáizhì的定性鑒定與定量分析。

二,、蛋白測(cè)序的主要步驟

步驟1：蛋白提取與定量

從細(xì)胞,、組織或體液中提取總蛋白，利用BCA,、Bradford等方法進(jìn)行濃度測(cè)定,，為后續(xù)處理提供標(biāo)準(zhǔn)化起點(diǎn)。

步驟2：蛋白還原,、烷基化與酶解

通過(guò)DTT還原二硫鍵,，IAA烷基化游離巰基，使dànbáizhì構(gòu)象展開(kāi),，隨后使用yídànbáiméi等進(jìn)行高效酶解,，生成可用于MS分析的多肽。

步驟3：多肽純化與分級(jí)

通過(guò)固相萃?。ㄈ鏑18柱）或高pH反相分級(jí)減少?gòu)?fù)雜度,，提升質(zhì)譜上機(jī)效率和數(shù)據(jù)覆蓋率。

步驟4：LC-MS/MS檢測(cè)

多肽經(jīng)液相系統(tǒng)分離后進(jìn)入質(zhì)譜儀進(jìn)行MS1和MS2檢測(cè)，獲得完整的質(zhì)譜數(shù)據(jù)集,。

步驟5：數(shù)據(jù)分析與蛋白鑒定

利用MaxQuant,、Proteome Discoverer等分析平臺(tái)進(jìn)行數(shù)據(jù)庫(kù)檢索、肽段定性與蛋白定量,、差異分析,、GO/KEGG注釋等信息學(xué)挖掘。

三,、dànbáizhì測(cè)序策略選擇：定量與修飾并重

根據(jù)研究目的不同,，dànbáizhì測(cè)序可選擇不同的策略：

1、Label-Free：無(wú)需標(biāo)記,，操作簡(jiǎn)便，適用于大樣本或早期篩選研究

2,、TMT/iTRAQ：同位素標(biāo)簽法,，適合多組間定量比較，靈敏度高

3,、SILAC：穩(wěn)定同位素代謝標(biāo)記,，適用于細(xì)胞體系內(nèi)源性標(biāo)記

4、PTM分析：專注于磷酸化,、乙?；确g后修飾位點(diǎn)的檢測(cè)與定量

百泰派克生物科技可根據(jù)項(xiàng)目需求，制定zuì適配的蛋白組策略,，實(shí)現(xiàn)覆蓋率,、定量精度和生物學(xué)深度的zuì佳平衡。

四,、百泰派克生物科技dànbáizhì測(cè)序服務(wù)優(yōu)勢(shì)

作為國(guó)內(nèi)lǐngxiān的蛋白組服務(wù)平臺(tái),，百泰派克生物科技在dànbáizhì測(cè)序方面構(gòu)建了系統(tǒng)化技術(shù)流程和行業(yè)lǐngxiān的質(zhì)譜平臺(tái)：

• 多種樣本類型支持：細(xì)胞、組織,、血清、外泌體等

• 高靈敏質(zhì)譜平臺(tái)：Orbitrap Exploris,、Fusion Lumos,、timsTOF等

• zhuānyè前處理流程：自動(dòng)化酶解、純化與富集系統(tǒng)

• 深度數(shù)據(jù)挖掘：定量分析,、通路富集,、蛋白互作網(wǎng)絡(luò)

• 多組學(xué)融合：可與轉(zhuǎn)錄組、代謝組,、化學(xué)蛋白組學(xué)聯(lián)動(dòng)解析

蛋白測(cè)序作為揭示功能蛋白狀態(tài)的核心手段,，正在從基礎(chǔ)研究邁向疾病診斷、靶點(diǎn)篩選、藥物機(jī)制研究等多領(lǐng)域拓展,。借助先進(jìn)的質(zhì)譜平臺(tái)與定制化流程,，百泰派克生物科技為科研人員提供高質(zhì)量、高通量,、可解釋的蛋白組數(shù)據(jù)支持,。歡迎聯(lián)系百泰派克，獲取定制化dànbáizhì測(cè)序方案,，讓您的研究更進(jìn)一步,！

百泰派克生物科技特色項(xiàng)目

一、蛋白測(cè)序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測(cè)序系統(tǒng)對(duì)dànbáizhì序列進(jìn)行分析,，提供基于質(zhì)譜的蛋白測(cè)序分析服務(wù),，包括對(duì)dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù,，Cduāncèxù和全序列分析,，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù)。對(duì)于未知理論序列的dànbáizhì,，提供基于從頭測(cè)序法的dànbáizhì從頭測(cè)序服務(wù),，對(duì)蛋白序列進(jìn)行分析。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.采用目前世界上先進(jìn)的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實(shí)現(xiàn)對(duì)所測(cè)定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測(cè)定蛋白N端多達(dá) 70個(gè)氨基酸序列;

4.可測(cè)定多種形式的樣品: 蛋白溶液,、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug,，即可完成檢測(cè);

6.測(cè)序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響,。

二,、dànbáizhì組學(xué)

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺(tái)結(jié)合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學(xué),、靶向dànbáizhì組學(xué),、多肽組學(xué)、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種dànbáizhì組學(xué)分析服務(wù),。此外,，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學(xué)服務(wù)，助力微量樣本蛋白組學(xué),、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作,。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1 .高通量定量蛋白分析:多對(duì)照組大規(guī)模實(shí)驗(yàn)分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標(biāo)記方法,，適用于分析組織,、細(xì)胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高,，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測(cè)較低豐度蛋白,，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析,，分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確。

三,、單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析,，采用金屬元素標(biāo)記物（通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體）標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細(xì)胞原理分離單個(gè)細(xì)胞,，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個(gè)細(xì)胞的原子質(zhì)量譜,，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號(hào)分子表達(dá)量。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.技術(shù)先進(jìn),，填補(bǔ)技術(shù)空白

采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù),，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問(wèn)題?？稍趩渭?xì)胞層面上對(duì)多種指標(biāo)同時(shí)進(jìn)行表征,，百泰派克生物科技可做到同時(shí)檢測(cè)51個(gè)目標(biāo)蛋白。

2.分析數(shù)量大,，成本較低

單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制,，所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個(gè)左右，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細(xì)胞,，實(shí)現(xiàn)了數(shù)量級(jí)的提高,，且成本不高于單細(xì)胞RNAseq。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化,，在臨床診斷,、疾病機(jī)制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會(huì)有新應(yīng)用方向,。除常規(guī)蛋白外,，質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測(cè)細(xì)胞存活率,、細(xì)胞大小,、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等,。

四,、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案,。我們能夠幫助您實(shí)現(xiàn)10,000個(gè)以上I型多肽和10,000個(gè)以上II型多肽的鑒定和識(shí)別,。通過(guò)我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺(tái)進(jìn)行免疫肽組學(xué)分析，可從zuì小的樣品材料中進(jìn)行可重復(fù)的識(shí)別和定量,。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥,、免疫疾病及傳染病的解決方案,，深入挖掘未知的靶標(biāo),。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù),，MALDI TOF,，高效色譜分離技術(shù)，提供一系列完善的生物藥物分析方案,，從dànbáizhì,、多肽、抗體,、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級(jí)結(jié)構(gòu)分析,，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù),，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì),。

百泰派克生物科技七大檢測(cè)平臺(tái)

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測(cè)和項(xiàng)目驗(yàn)證等zhuānyè服務(wù),。公司實(shí)驗(yàn)室遵循NMPA,、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則,，通過(guò)CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證,，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份,，設(shè)備定期計(jì)量/期間核查,，軟件審計(jì)追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù),，支持新藥研發(fā),、藥物申報(bào)注冊(cè)和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系,，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測(cè)分析服務(wù),；

2.獲國(guó)家CNAS實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù),；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋dànbáizhì組學(xué),、多肽組學(xué)、代謝組學(xué),、生物藥物表征,、單細(xì)胞分析、單細(xì)胞質(zhì)譜流式,、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等,；

4.七大質(zhì)量控制檢測(cè)平臺(tái)，滿足您一站式服務(wù)需求,；

5.服務(wù)3000+企業(yè),，10000+客戶的選擇,；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

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