ELISA實(shí)驗(yàn)看似簡(jiǎn)單,其實(shí)不然,。記得以前一個(gè)同學(xué)第一次做ELISA實(shí)驗(yàn),,跟我說(shuō),ELISA實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)直太簡(jiǎn)單了,,到第2次在次做ELISA實(shí)驗(yàn)的時(shí)候,,他驚訝了,說(shuō)結(jié)果差別怎么這么大(同一份標(biāo)本),,第三次的時(shí)候,,他決定認(rèn)真的做一次,爭(zhēng)取做到同一份標(biāo)本,,這次讓他感受到ELISA并不是那么簡(jiǎn)單,,發(fā)覺(jué)其實(shí)挺難的。今天的文章中為大家講述一些ELISA實(shí)驗(yàn)中的小技巧,希望對(duì)大家有所幫助,!
1.操作前應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)的物理參數(shù)有充分的了解,,如環(huán)境溫度(保持在18C~25℃)、反應(yīng)孵育溫度和孵育時(shí)間,、洗滌的次數(shù)等,,要先查看水育箱溫度,ELISA試劑盒是否符合要求,。
2.正確使用加樣器加樣器應(yīng)垂直加入標(biāo)本或試劑,,避免刮擦包被板底部。加樣過(guò)程中避免液體外濺,,血清殘留在反應(yīng)孔壁上,,加樣器吸頭要清洗干凈,避免污染,,加樣次序要與說(shuō)明書(shū)一致,,否則可導(dǎo)致結(jié)果錯(cuò)誤,實(shí)驗(yàn)重復(fù)性差,。
3.手工洗板加洗液時(shí)沖擊力不要太大,,洗滌次數(shù)不要超過(guò)說(shuō)明書(shū)推薦的洗滌次數(shù),洗液在反應(yīng)孑L內(nèi)滯留的時(shí)間不宜太長(zhǎng),。不要使洗液在孑L間竄流,,造成孔問(wèn)污染,導(dǎo)致假陰性或假陽(yáng)性,。
4.要保證加液量一致ELISA試劑盒我們?cè)谑褂脮r(shí)感覺(jué)滴瓶加液不如加樣器好,,滴瓶不易控制加液量不準(zhǔn),造成顯色不統(tǒng)一,,判斷錯(cuò)誤,。
5.顯色液量不可過(guò)多加樣的工作環(huán)境不能處于陽(yáng)光直射的環(huán)境下,加顯色系統(tǒng)后要避光反應(yīng),,顯色液量不能過(guò)多,,以免顯色過(guò)強(qiáng)。
ELISA試劑盒的影響因素應(yīng)選用有國(guó)家批準(zhǔn)文號(hào),,質(zhì)量靠得住的產(chǎn)品,,不能圖便宜,,忽視質(zhì)量保證,。試劑應(yīng)妥善保存于4℃冰箱內(nèi),在使用時(shí)先平衡至室溫,,不同批號(hào)的試劑組分不宜交叉使用,。試劑開(kāi)啟后要在一周內(nèi)用完,剩余的試劑下次用時(shí)應(yīng)先檢查是否變質(zhì),,顯色劑如被污染變色將造成全部顯色,,導(dǎo)致錯(cuò)誤結(jié)果,。