ELISA試劑盒操作步驟知多少？

時(shí)間：2023/6/29閱讀：1106

　　操作步驟

　?。ㄒ唬悠窚?zhǔn)備

　　1.取動(dòng)物全血按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮,，無溶血,、無污染。樣品1周內(nèi)可于2～8℃保存,，長期需置-20℃保存,。

　　2.用樣品稀釋液將待檢血清按100倍稀釋（如2μl血清加入198μl樣品稀釋液中，混勻）,。陰,、陽性對(duì)照不用稀釋。

　　3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解,，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋,。

　　（二）檢驗(yàn)方法

　　1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復(fù)至室溫,。

　　2.取所需用量酶標(biāo)板條,，設(shè)空白對(duì)照1孔、陰性/陽性對(duì)照各2孔,，未用的板條盡快密封,，2～8℃保存。

　　3.空白對(duì)照孔加樣品稀釋液100μl,；陰,、陽性對(duì)照孔分別加入陰、陽性對(duì)照100μl,；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl,。

　　4.混勻，置37℃反應(yīng)30分鐘,。

　　5.扣去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，重復(fù)洗滌5次,，拍干。

　　6.每孔加酶標(biāo)記物100μl（空白孔除外）,。置37℃反應(yīng)30分鐘,。

　　7.洗滌，同步驟5,。

　　8.每孔依次加底物液A,、底物液B各50μl，混勻,，37℃避光反應(yīng)10分鐘,。

　　9.每孔加終止液50μl，混勻,，用空白孔調(diào)零,，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A值）。



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