【產(chǎn)品規(guī)格】

1. TL25  25 次/盒

2. TL50  50 次/盒

【產(chǎn)品說(shuō)明】

端粒長(zhǎng)度試劑盒（Telomeres）：是真核生物線性染色體末端的非編碼串聯(lián)重復(fù)性(TTAGGG)n陣列，端粒長(zhǎng)度的變化,，與衰老,、癌癥,、或神經(jīng)退行性等多種疾病相關(guān)。定量PCR法是檢測(cè)端粒長(zhǎng)度的經(jīng)典技術(shù),，用時(shí)短,，操作簡(jiǎn)單，結(jié)果準(zhǔn)確,，適用于批量樣本檢測(cè),。

本產(chǎn)品試劑盒采用雙色熒光 qPCR（SYRBgreen+VIC）檢測(cè)端粒相對(duì)長(zhǎng)度，檢測(cè)對(duì)象為血液,、口腔拭子或細(xì)胞DNA,。該試劑盒具有以下特點(diǎn)。

1. 穩(wěn)定：全程閉管操作,，無(wú)交叉污染,。

2. 可靠：端粒與內(nèi)參單管檢測(cè)，減少孔間干擾,。

內(nèi)參基因?yàn)槎嗫截?，與端粒量差降低。

3. 方便：操作簡(jiǎn)單,，無(wú)需電泳步驟,。

4. 定量： △CT 值，可定量檢測(cè)端粒相對(duì)長(zhǎng)度,。

【運(yùn)輸及保存條件】

低溫冷凍運(yùn)輸,， -20℃保存，有效期 1 年,，凍融以后,，4℃保存，有效期4周,。

【產(chǎn)品組分】

注：本試劑盒提供試劑,，使用前請(qǐng)上下輕柔顛倒十次混勻，后低速離心,、小心開(kāi)啟,。避免起泡。

【操作步驟】

1. 樣品質(zhì)控

使用商業(yè)化DNA抽提試劑盒提取血液,、細(xì)胞或組織DNA,，DNA純度A260/A280≈1.8，檢測(cè)樣品濃度標(biāo)化為15~20ng/µL,，上樣4µL,。

注：標(biāo)準(zhǔn)品濃度已標(biāo)化為15~20ng/µL，上樣4µL,。樣品及標(biāo)準(zhǔn)品濃度過(guò)高或過(guò)低會(huì)影響擴(kuò)增效率,，對(duì)實(shí)驗(yàn)造成干擾,，測(cè)量結(jié)果誤差較大。

2. qPCR反應(yīng)體系及條件

反應(yīng)體系以20µL為例

PCR儀設(shè)置以 ABI 7500為例,，其他型號(hào)定量PCR儀應(yīng)通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行參數(shù)校正或咨詢專業(yè)技術(shù)人員,。

【基線設(shè)置】

內(nèi)參基線設(shè)定：以標(biāo)準(zhǔn)品基線設(shè)定內(nèi)參基線，將內(nèi)參的基線設(shè)定為6~15個(gè)循環(huán),。

端?；€設(shè)定：以標(biāo)準(zhǔn)品基線設(shè)定端粒基線,，將端粒的基線設(shè)定為3~15個(gè)循環(huán),。

【閾值設(shè)置】

內(nèi)參閾值設(shè)定：以標(biāo)準(zhǔn)品CT值設(shè)定內(nèi)參擴(kuò)增曲線閾值，將內(nèi)參的 CT 值定為 21±1,。

端粒閾值設(shè)定：以標(biāo)準(zhǔn)品CT值設(shè)定端粒擴(kuò)增曲線閾值,，將端粒的 CT 值定為13±1 。

端粒長(zhǎng)度試劑盒說(shuō)明：

（1）如果標(biāo)準(zhǔn)品的內(nèi)參CT 值>25,，但陰性對(duì)照管的內(nèi)參CT 值正常,， 表明試劑盒擴(kuò)增效率下降或儀器運(yùn)行障礙。

（2）如果陰性對(duì)照管的內(nèi)參或端粒CT＜25,，表明在環(huán)境或加樣過(guò)程中存在輕微污染,。

備注：

1. 樣本檢測(cè)以及標(biāo)準(zhǔn)品的使用應(yīng)做技術(shù)上三重復(fù)，陰性對(duì)照做單重復(fù),。

2. 如果檢測(cè)樣本為血液DNA,，可以將所得端粒相對(duì)長(zhǎng)度在上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司構(gòu)建的1500例中國(guó)人群數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)，評(píng)估樣本個(gè)體端粒的相對(duì)長(zhǎng)度,；若選用其他樣本,，建議自行構(gòu)建數(shù)據(jù)庫(kù)并做進(jìn)一步分析。

3. 端粒長(zhǎng)度計(jì)算方法（T/S）：先分別計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)品與樣品的△CT=CT（端粒）-CT（內(nèi)參）

再計(jì)算 T/S=log2 (△CT(樣品)-△CT（標(biāo)準(zhǔn)品）)

注：T為待測(cè)樣品,，S為標(biāo)準(zhǔn)品,，T/S為待測(cè)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品的端粒相對(duì)長(zhǎng)度比。