檢測原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被大豆球蛋白（globulin）抗體的包被微孔中,，依次加入標本、標準品,、HRP標記的檢測抗體,，經(jīng)過溫育并全部洗滌。用底物TMB顯色,，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大豆球蛋白（globulin）呈正相關,。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值）,，計算樣品濃度。

樣品收集,、處理及保存方法

1.  樣本不能含疊氮鈉（NaN3）,，因為疊氮鈉（NaN3）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑制劑。

2.  標本采集后盡早進行提取,，提取按相關文獻進行,。

3.  植物萃取液或其它相關樣本：請1000 x g離心20分鐘,，取上清即可檢測。

4.  保存：如果樣本收集后不及時檢測,，請按一次用量分裝,，凍存于-20℃，避免反復凍融,，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

自備物品

1. 酶標儀（450nm）

2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL,、20-200uL,、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

操作注意事項

1.  試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘,。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶,，這屬于正常現(xiàn)象,，水浴加熱使結晶全部溶解后再使用,。

2.  實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存,。

3.  濃度為0的S0號標準品即可視為陰性對照或者空白；按照說明書操作時樣本已經(jīng)稀釋5倍,，最終結果乘以5才是樣本實際濃度,。

4.  嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作,。

  所有液體組分使用前充分搖勻,。

試劑盒組成

注：標準品（S0-S5）濃度依次為：0、50,、100,、200、400,、800 ng/mL

試劑的準備

 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋,，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

洗板方法

1.  手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液,，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干,，如此洗板5次,。

2.  自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min,，洗板5次,。

操作步驟

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設置標準品孔和樣本孔,，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL,；

3.  樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL,；空白孔不加,。

4.  除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL,，用封板膜封住反應孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

  棄去液體,，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液，靜置1min,，甩去

1.洗滌液,，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）,。

2.  每孔加入底物A,、B各50μL，37℃避光孵育15min,。

3.  每孔加入終止液50μL,，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值,。

結果判斷

 繪制標準曲線：在Excel工作表中,，以標準品濃度作橫坐標，對應OD值作縱坐標,，繪制出標準品線性回歸曲線,，按曲線方程計算各樣本濃度值。

試劑盒性能

1.  準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值,，大于等于0.9900,。

2.  靈敏度：最少檢測濃度小于1.0 ng/mL。

3.  特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應,。

 重復性：板內(nèi),、板間變異系數(shù)均小于15%。

1.  貯藏：2-8℃,，避光防潮保存,。

2.  有效期：6個月

免責聲明

1.   試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或人體實驗，否則所產(chǎn)生的一切后果,，由實驗者承擔,，本公司概不負責。

2.   嚴格按照說明書操作,，實驗者違反說明書操作,，后果由實驗者承擔。