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當(dāng)前位置:上海佰利萊生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>大鼠納豆激酶(NK)elisa試劑盒 說明書
檢測原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包被納豆激酶(NK)抗體的包被微孔中,依次加入標本,、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并徹-底洗滌,。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的納豆激酶(NK)呈正相關(guān),。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品活性,。
操作步驟
從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
設(shè)置標準品孔和樣本孔,,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL,。
樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL,;空白孔不加,。
除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,,用封板膜封住反應(yīng)孔,,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
棄去液體,,吸水紙上拍干,,每孔加滿洗滌液,靜置1min,,甩去洗滌液,,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機洗板),。
每孔加入底物A,、B各50μL,37℃避光孵育15min,。
每孔加入終止液50μL,,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值,。
結(jié)果判斷
繪制標準曲線:在Excel工作表中,,以標準品濃度作橫坐標,對應(yīng)OD值作縱坐標,,繪制出標準品線性回歸曲線,,按曲線方程計算各樣本濃度值。
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