一、流式細胞術
流式細胞術（Flow Cytometry,，FCM）從字面意義理解,，Flow—Fluid、Cyto—Cell,、Metry—Measurement,，是一種對液流中排成單列的細胞或其它生物微粒（如微球，細菌,，小型模式生物等）逐個進行快速定量分析和分選的技術,。其特點是通過快速測定庫爾特電阻、熒光,、光散射和光吸收來定量測定細胞DNA含量,、細胞體積、蛋白質含量,、酶活性,、細胞膜受體和表面抗原等許多重要參數。根據這些參數將不同性質的細胞分開,，以獲得供生物學和醫(yī)學研究用的純細胞群體,。
1.流式細胞術的關鍵優(yōu)勢：
高通量：一次實驗能夠分析數千至數百萬個細胞，幾秒內完成大規(guī)模數據收集,。
單細胞多參數分析：一次實驗可同時測量單個細胞的多個參數,，如細胞大小、顆粒性,、表面標志物和內部復雜性,。
數據精確度高：通過熒光信號與細胞大小等物理參數結合，提供精確的亞群分析,。
2.核心應用：
免疫表型分析（Immunophenotyping）：通過熒光標記的抗體鑒定不同的免疫細胞亞群,。
細胞周期分析：評估細胞群體的不同周期階段。
細胞凋亡檢測：通過標記凋亡相關分子檢測細胞凋亡情況,。
細胞活力檢測：結合活細胞與死細胞染料,，分析細胞活力狀態(tài)。
二,、流式細胞術原理
1. 特定波長的激光束直接照射到高壓驅動的液流內的細胞,，產生的光信號被多個接收器所接收，包括激光束直線方向上接收到的散射光信號（前向角散射）和激光束垂直方向上接收到的光信號（散射光信號（側向角散射）和熒光信號）,。液流中懸浮的直徑從0.2-150 μm的細胞或顆粒能夠使激光束發(fā)生散射,，細胞上結合的熒光化合物被激光激發(fā)后能夠發(fā)射熒光,。散射光信號和熒光信號被相應的接收器接收，根據接受到的信號的強弱從而反映每個細胞的物理學特征,。
2. 熒光的原理 是流式細胞術中的核心,。熒光分子（稱為熒光團，fluorophore）通過吸收外部光源（如激光）產生激發(fā),，隨后回到基態(tài)時發(fā)出熒光,。這一發(fā)射光信號可被檢測，并用于標記不同的細胞組分,，如細胞表面或內部抗原,。
3. 熒光過程的三個階段：
激發(fā)（Excitation）：熒光分子吸收激光能量，電子從基態(tài)躍遷到激發(fā)態(tài),。
激發(fā)態(tài)壽命（Excited Lifetime）：熒光分子處于激發(fā)態(tài)的時間極短,，通常為納秒級。
發(fā)射（Emission）：電子回到基態(tài)時釋放多余的能量,，以較低能量的光子形式發(fā)射,，波長比激發(fā)光更長。
4. 斯托克斯位移（Stokes Shift）：
斯托克斯位移是指激發(fā)光的波長與發(fā)射光波長之間的差異,，發(fā)射光總是比激發(fā)光的波長長,、能量低。這個位移是區(qū)分不同熒光染料發(fā)射信號的基礎,。利用這種位移可以有效避免激發(fā)光與發(fā)射光的混淆,。
5.熒光染料的選擇：
熒光染料是根據它們的激發(fā)波長和發(fā)射波長來選擇的。常見的熒光染料如Alexa Fluor系列,、FITC,、PE等，它們有不同的光譜特性,，適用于不同的激光器配置,。（Alexa Fluor 488 的激發(fā)波長為488 nm，發(fā)射波長為530 nm）
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| Biolegend | 107628 | APC/Cyanine7 anti-mousel-A/-E Antibody |
| Biolegend | 151210 | PE anti-mouse/human Ki-67 Antibody |
| Biolegend | 103205 | FITC anti-mouse/human CD45R/B220 Antibody |
| Biolegend | 130021 | APC anti-mouse Tim-4 |
| Biolegend | 740150 | LEGENDplex™ Mouse Inflammation Panel (13-plex) with Filter Plate |
| Biolegend | 801202 | Purified anti- Tubulin β 3 (TUBB3) |
| Biolegend | 145513 | Brilliant Violet 605 anti-mouse CD185 (CXCR5) |
| Biolegend | 109110 | PE/Cyanine7 anti-mouse CD279 (PD-1) Antibody |
| Biolegend | 480172 | MojoSort™ Mouse CD146 (LSEC) Selection Kit |
| Biolegend | 480017 | MojoSort Buffer (5X) |
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