分析型流式細(xì)胞儀檢測原理
將待測樣品制成單細(xì)胞懸液,，在鞘液的包裹下進(jìn)入流式細(xì)胞儀內(nèi)的檢測區(qū)域,，細(xì)胞在激光的照射下會發(fā)生散射和折射，產(chǎn)生的散射光信號和熒光信號由不同的通道接收,。其中前向角散射光（FSC）的強(qiáng)度與細(xì)胞直徑成正相關(guān),，可以理解為細(xì)胞直徑越大，F(xiàn)SC越強(qiáng),，細(xì)胞直徑越小,，F(xiàn)SC越弱。所以可以利用細(xì)胞的FSC值初步比較細(xì)胞的大小,，利用FSC值對細(xì)胞進(jìn)行分群和分類,。
側(cè)向角散射光（SSC）的強(qiáng)度與細(xì)胞內(nèi)顆粒結(jié)構(gòu)復(fù)雜程度成正相關(guān)（與細(xì)胞中所含的細(xì)胞器、細(xì)胞核等的數(shù)量成正比）,，可以理解為細(xì)胞內(nèi)顆粒結(jié)構(gòu)越復(fù)雜,，SSC越強(qiáng)；細(xì)胞內(nèi)顆粒結(jié)構(gòu)越簡單,，SSC越弱。所以可以利用細(xì)胞的SSC值初步比較細(xì)胞的顆粒度,，利用SSC值對細(xì)胞進(jìn)行分群和分類,。
當(dāng)細(xì)胞通過激光束時(shí)，檢測器會檢測到細(xì)胞或顆粒的散射光,，放置在前面的檢測器檢測FSC值,，而放置在側(cè)面的多個(gè)檢測器檢測SSC值。通過綜合分析前向散射FSC和側(cè)向散射SSC的數(shù)據(jù),，便能根據(jù)細(xì)胞大小,、形狀和復(fù)雜度將其進(jìn)行分群分類。由于樣品細(xì)胞不需要標(biāo)記任何熒光化合物偶聯(lián)抗體,，直接上樣分析得到FSC值和SSC值,，其值代表細(xì)胞的大小和顆粒度兩個(gè)物理特征，所以FSC-SSC散點(diǎn)圖又稱為 “物理圖",。
分選型流式細(xì)胞儀檢測原理
當(dāng)細(xì)胞懸液放入樣品管中,，被高壓壓入流動室內(nèi)。流動室內(nèi)充滿鞘液,，在鞘液的包裹和推動下,，細(xì)胞被排成單列，以一定速度從流動室噴口噴出,。在流動室的噴口上配有一個(gè)超高頻的壓電晶體,，充電后振動,，使噴出的液流斷裂為均勻的液滴，待測細(xì)胞就分散在這些液滴之中,。將這些液滴充以正,、負(fù)不同的電荷，當(dāng)液滴流經(jīng)過帶有幾千伏的偏轉(zhuǎn)板時(shí),，在高壓電場的作用下偏轉(zhuǎn)落入各自的收集容器中,，沒有充電的液滴落入中間的廢液容器，從而實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的分離,。流式細(xì)胞儀除了根據(jù)FSC和SCC散射度或熒光(如DNA,、RNA或蛋白含量，酶活性,，特異抗原) 散射度差異來分離細(xì)胞外,，更多的采用細(xì)胞表面抗原標(biāo)記的熒光強(qiáng)度差異來分離細(xì)胞。每種細(xì)胞表面具有du te的抗原,，當(dāng)形態(tài)學(xué)檢測難以區(qū)別時(shí),，免疫表型參數(shù)對細(xì)胞分選有決定性作用。
流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果
熒光信號和散射光信號通過波長選擇的濾光片,，由相應(yīng)的光電管和電子檢測器接收并轉(zhuǎn)換成電信號,，經(jīng)放大器放大后送入計(jì)算機(jī)并進(jìn)行分析顯示和結(jié)果輸出，測定的結(jié)果常用流式直方圖,、流式散點(diǎn)圖,、流式密度圖和流式等高線圖來表示。
流式細(xì)胞術(shù)樣本類型
流式細(xì)胞儀可檢測多種樣本：外周血,、骨髓,、細(xì)胞穿刺液、洗脫液,、實(shí)體組織,、培養(yǎng)細(xì)胞、微生物,。
流式細(xì)胞術(shù)應(yīng)用
1.流式細(xì)胞術(shù)可以用來檢測細(xì)胞表面以及胞內(nèi)的各種標(biāo)志,，對細(xì)胞進(jìn)行分群鑒定以及各種蛋白表達(dá)量高低的比較。
2.通過標(biāo)記Ki67,、BCL-2,、caspases等增殖及凋亡相關(guān)基因，流式細(xì)胞術(shù)可用來檢測細(xì)胞的增殖以及凋亡,。
3.流式細(xì)胞術(shù)可用來分析細(xì)胞周期,。細(xì)胞核DNA含量隨著細(xì)胞增殖周期時(shí)相的不同而發(fā)生變化，用DNA染料進(jìn)行染色,，DNA含量多,，熒光信號強(qiáng),，DNA含量少，熒光強(qiáng)度低,。
4.在腫瘤學(xué)研究中尤其常用,，流式細(xì)胞術(shù)可以用于判斷藥物對腫瘤細(xì)胞影響、腫瘤的生長速度等,。
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