一,、動物原代細胞
動物原代細胞是通過機械或酶的方法，或兩者的結(jié)合,，直接從動物組織中分離和純化出來的,。它們通常攜帶來自特定組織(如腦、肝,、胰腺,、肺、心肌,、腎,、乳腺、前列腺,、睪丸,、甲狀腺、胃,、小腸,、結(jié)腸、骨骼肌,、脂肪組織和皮膚)的原始動物細胞的所有特征,。動物原代細胞可以從健康或患病的動物身上提取，在組織移除之前不需要進行其他實驗,。
一旦目標(biāo)組織在無菌條件下被消化和解剖,，將被過濾和離心進一步純化，重懸的原代細胞將被計數(shù)并用冷凍保存培養(yǎng)基冷凍保存或用其有利的天然(由天然存在的生物液體組成,，如血漿,，組織提取物等)或人工培養(yǎng)基(由必需氨基酸，維生素,，鹽,，血清，碳水化合物,，輔助因子等)在孵育前為其正常生長所需，培養(yǎng)基將在幾小時后根據(jù)特定細胞類型進行更換,。例如,，圖1顯示了從小鼠肝臟中分離和純化原代肝細胞的過程。在這種條件下純化的動物原代細胞被命名為傳代0 (P0),，它們既可以在冷凍瓶中作為庫存短時間冷凍保存,，也可以直接在培養(yǎng)瓶中交付給我們的客戶。
到目前為止，AcceGen提供了900多種不同的動物原代細胞用于研究,，提供了各種各樣的原代細胞,，包括小鼠原代細胞、大鼠原代細胞,、牛原代細胞,、猴原代細胞、兔原代細胞,、豬原代細胞和其他原代細胞,，包括來自綿羊、鳥類,、雞,、豚鼠、火雞,、馬,、山羊和貓的原代細胞。此外,，我們的動物原代細胞也涵蓋了許多不同的菌株,。例如，AcceGen提供的小鼠原代細胞包括但不限于CD1,、ICR,、BALB/c、B129,、CF1,、C57BL/6、B6129SF2/J,、C57BLKS/J和DBA/2菌株,。
二、貼壁vs.懸浮
動物原代細胞既可以作為貼壁培養(yǎng)物生長,，也可以保持懸浮狀態(tài),。貼壁細胞依賴于錨定，并以單層形式增殖,，需要附著在固體或半固體底物上才能增殖。貼壁動物原代細胞在細胞外基質(zhì)的幫助下粘附在培養(yǎng)容器上,，這些細胞通常來自于不動的組織,，存在于結(jié)締組織網(wǎng)絡(luò)中，例如上皮細胞和成纖維細胞,。由于這種培養(yǎng)血管的底部覆蓋著一層單細胞厚度的連續(xù)細胞,，因此它們也被稱為單層培養(yǎng)。大多數(shù)動物原代細胞以貼壁培養(yǎng)的方式生長,。由于它們是單層生長的,，因此在培養(yǎng)維護時可以方便地將其直接轉(zhuǎn)移到蓋玻片上,，并在后期的實驗中在顯微鏡下進行檢查。
懸浮細胞,，也稱為非貼壁或錨定獨立細胞,，不附著在培養(yǎng)容器表面。相反,，它們在培養(yǎng)液中漂浮生長,。懸浮細胞可以維持在沒有經(jīng)過組織培養(yǎng)處理的培養(yǎng)瓶中。然而,，為了保持足夠的氣體交換,，培養(yǎng)基可能需要攪拌，這通常是用磁力攪拌器或旋轉(zhuǎn)旋轉(zhuǎn)燒瓶來實現(xiàn)的,。此外,，與貼壁動物原代細胞相比，懸浮動物原代細胞更容易傳代,，生長速度更快,，它們也不需要與胰蛋白酶或膠原酶解離，盡管每日細胞計數(shù)和活力測定可能需要遵循它們的生長模式,。造血干細胞(來源于血液,、骨髓或脾臟)和神經(jīng)干細胞是懸浮原代細胞的兩個例子。
三,、動物原代細胞的優(yōu)勢
雖然動物原代細胞的壽命有限,，但它們?yōu)檠芯咳藛T提供了一些du特的好處。首先,，由于動物原代細胞無需實驗室修飾即可密切反映體內(nèi)條件,，因此它們是在體內(nèi)研究細胞生物學(xué)功能的替代方法。作為人類系統(tǒng)的模型,，動物原代細胞可用于檢查廣泛的疾病機制,，并在將結(jié)果應(yīng)用于人類之前評估新的治療方法。動物原代細胞培養(yǎng)的理化和生理條件都是可調(diào)節(jié)的,，如培養(yǎng)基的pH,、溫度、O2/CO2濃度,、滲透壓等,。這樣的研究為了解廣泛的人類疾病提供了關(guān)鍵的見解。另一方面,，對來自不同動物的分離細胞進行體外培養(yǎng)也有助于加深對不同細胞的不同功能和運作機制的理解,。不同物種間細胞代謝的研究和細胞生理生化的研究就是很好的例子。此外，動物原代細胞也可以作為細胞毒性測定的重要模型,。例如,，可以研究各種藥物或化合物對特定細胞類型(如神經(jīng)元細胞或肝細胞)的作用。來自神經(jīng),、肝臟,、胰腺、肺,、心臟,、腎臟、胃,、腸,、骨骼、脂肪,、皮膚和眼部系統(tǒng)的動物原代細胞都是生物醫(yī)學(xué)研究和藥物發(fā)現(xiàn)中常用的模型,。此外，通過使用動物原代細胞,，可以避免在實驗中使用動物的倫理,、道德和法律問題。
為了進一步闡述動物原代細胞的du特優(yōu)勢,，表1特地總結(jié)了原代細胞培養(yǎng)和連續(xù)細胞系之間的不同特征,。
與原代細胞培養(yǎng)相比，連續(xù)細胞系具有無限數(shù)量的細胞代,。它們在培養(yǎng)物中生長得更快,，細胞密度更高。此外,，由于連續(xù)細胞培養(yǎng)具有不朽性和致瘤性,，它們沒有接觸抑制，失去了增殖的限制,。它們通常以多層或懸浮的方式生長,，具有在大規(guī)模生物反應(yīng)器中培養(yǎng)的潛力。然而,，與動物原代細胞相比,，連續(xù)細胞系的主要缺點是染色體不穩(wěn)定、表型變異以及與供體組織相關(guān)的特異性和特征性標(biāo)記物的變化[4],。因此,，連續(xù)細胞系不能代表動物原代細胞的體內(nèi)狀態(tài)。
四,、結(jié)論
直接從動物組織中分離的動物原代細胞保持了許多重要的標(biāo)志物和體內(nèi)功能。然而，它們中的大多數(shù)具有有限的壽命和有限的擴增能力,。因此,，始終使用低傳代的動物原代細胞至關(guān)重要。盡管一些動物原代細胞類型,，比如神經(jīng)元,，甚至不具備分裂能力。
值得一提的是,，動物原代細胞從來都不是100%純的,，所以使用的細胞傳代越高，被污染的細胞生長超過目標(biāo)細胞的風(fēng)險就越大,。同時,，即使對于一些可以比其他細胞傳代次數(shù)更多的原代細胞類型，每次傳代總是會發(fā)生表型和遺傳變化,。這些遺傳變化隨后會導(dǎo)致表觀遺傳變化,。因此，我們強烈建議客戶盡可能早地使用動物原代細胞傳代,，以防止遺傳漂變,。
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