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細胞凍存是指將細胞放在低溫環(huán)境,，以達到減少細胞代謝的作用，從而達到對細胞進行長期儲存進行保種的目的,，以供后續(xù)實驗或臨床使用,。那么你知道細胞凍存的原理是什么嗎？讓我們一起來看看吧,！

一,、細胞凍存原理

1. 當溫度低至-70℃時，細胞內的酶活性全部停止,，代謝活動停止,，故實現(xiàn)長期保存的目的。

2. 隨著溫度降低,，細胞內外的水分都會結晶,，所形成的冰晶會造成細胞膜和細胞器的破壞，從而引起細胞死亡,，特別是0~-20℃的階段,，冰晶呈針狀，及其引發(fā)細胞損傷,。在不加任何保護劑條件下直接凍存細胞時,，細胞內和外環(huán)境中的水都會形成冰晶，能導致細胞內發(fā)生機械損傷,、電解質升高,、滲透壓改變、脫水,、pH改變,、蛋白變性等,，能引起細胞死亡。

3. 常見的冷凍保護劑是甘油或二甲基亞砜（DMSO）,。DMSO能快速穿透細胞膜進入細胞,，降低冰點，延緩凍存過程,，同時增加細胞膜的通透性,，提高細胞內離子濃度，減少細胞內冰晶的形成,，從而達到保護細胞的目的,。

二、保護劑的選擇

1. 細胞凍存中,， 一般使用DMSO 作為保護劑,。在細胞凍存中,， DMSO 使用的最終濃度一般是 5-15% ,，某種具體細胞的凍存液中的DMSO濃度可以從ATCC查到。

2. 對特別敏感的細胞在凍存時需測試適用的凍存液,。例如神經(jīng)元細胞凍存時需選擇無血清凍存液,，避免復蘇后分化。

三,、細胞凍存的最佳時期

1. 用來凍存的細胞一般選擇在細胞對數(shù)生長期,，匯合度約 90% 的時候，這時細胞生長狀態(tài)好,，細胞數(shù)量也多,，并且在收獲細胞前 24 小時換一次培養(yǎng)液。

2. 對培養(yǎng)物進行微生物污染物檢測,，特別是支原體,，確保細胞沒有任何的污染。在細胞的收集過程中,，實驗操作要盡可能的溫和,，避免細胞受損。

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