你知道瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)方法是什么嗎,?有什么注意事項(xiàng)呢?讓我們一起來(lái)看看吧,!
一,、瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)方法
1. 擇適合樣品預(yù)期片段大小的瓊脂糖凝膠濃度百分比。將瓊脂糖粉末與用于運(yùn)行凝膠的相同類型的緩沖液(TAE)結(jié)合起來(lái),,加熱使混合物融化,,避免沸騰。
2. 選擇所需尺寸的凝膠澆注模具和梳子,,為樣品和marker提供足夠數(shù)量的孔,,以及容納每個(gè)待裝樣品數(shù)量的孔容量。
3. 膠凝固后,,將凝膠放入電泳儀中,,電泳液沒過(guò)凝膠,根據(jù)加入量的多少,,決定混合多少ul的loding buffer,,將樣液混合loding buffer用移液槍加入到凝膠中,。
4. 蓋上蓋子,確保電極和蓋子的方向正確,,注意正負(fù)極,, 打開電泳儀 ,設(shè)定凝膠運(yùn)行的時(shí)間和電壓,,根據(jù)樣品大小確定運(yùn)行時(shí)間,。
二、瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)
1. 瓊脂糖凝膠溶液配制時(shí)總液體量不宜超過(guò)錐型瓶50%容量,。
2. 加熱時(shí)可以中途搖動(dòng)搖動(dòng),,防止瓊脂糖凝膠凝在錐形瓶底部。
3. 注意不要損傷梳底部的凝膠,。防止加樣時(shí)樣品漏出,。
4. 凝膠濃度越低,分辨的片段越大,;凝膠濃度越高,,分辨的片段越小。
5. 使用紫外透射儀觀察,,紫外光對(duì)DNA 分子有損傷作用,,不可長(zhǎng)時(shí)間照射。從膠上回收DNA時(shí),,應(yīng)盡量縮短光照時(shí)間以減少紫外光切割DNA,。
6. 紫光燈下觀察時(shí)應(yīng)戴上防護(hù)鏡,以免損傷眼睛,。
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