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你知道什么是你知道什么是瓊脂糖凝膠電泳嗎,？讓我們一起來看看吧！

一,、瓊脂糖凝膠的特點(diǎn)

核酸分子是兩性解離分子,，在高于其等電點(diǎn)的電泳緩沖液中，其堿基不解離,，而磷酸基團(tuán)全部解離，核酸分子因而帶負(fù)電荷,，電泳時(shí)向正極遷移,。

瓊脂糖主要從海洋植物瓊脂中提取而來并經(jīng)糖基化修飾，為一種聚合鏈線性分子,，使用瓊脂糖凝膠作為電泳支持介質(zhì),，發(fā)揮分子篩功能，使得大小和構(gòu)象不同的核酸分子的遷移率出現(xiàn)較大差異,，從而達(dá)到分離的目的,。

因此，目前多用瓊脂糖為電泳支持物進(jìn)行平板電泳,，其優(yōu)點(diǎn)如下,。

（1）瓊脂糖凝膠電泳操作簡單，電泳速度快,，樣品不需事先處理就可以進(jìn)行電泳,。

（2）瓊脂糖凝膠結(jié)構(gòu)均勻，含水量大（約占 98%~99%）,，近似自由電泳,，樣品擴(kuò)散較自由電流，對樣品吸附極微,， 因此電泳圖譜清晰,，分辨率高，重復(fù)性好,。

（3）瓊脂糖透明無紫外吸收,，電泳過程和結(jié)果可直接用紫外光燈檢測及定量測定。

（4）電泳后區(qū)帶易染色,，樣品極易洗脫,，便于定量測定。制成干膜可長期保存,。

二,、DNA 的瓊脂糖凝膠電泳

瓊脂糖凝膠電泳對核酸的分離作用主要是依據(jù)它們的相對分子量質(zhì)量及分子構(gòu)型，同時(shí)與凝膠的濃度也有密切關(guān)系。

1. 核酸分子大小與瓊脂糖濃度的關(guān)系

（1）DNA分子的大小在凝膠中,，DNA 片段遷移距離（遷移率）與堿基對的對數(shù)成反比,，因此通過已知大小的標(biāo)準(zhǔn)物移動的距離與未知片段的移動距離時(shí)行比較，便可測出未知片段的大小,。

（2）瓊脂脂糖的濃度 如下表所示,，不同大小的DNA需要用不同濃度的瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳分離。

核酸構(gòu)型與瓊脂糖凝膠電泳分離的關(guān)系

2. 同構(gòu)型 DNA 的移動速度次序?yàn)椋汗﹥r(jià)閉環(huán) DNA（covalently closed circular,，cccDNA）>直線 DNA>開環(huán) 的雙鏈環(huán)狀 DNA,。

當(dāng)瓊脂糖濃度太高時(shí)，環(huán)狀 DNA不能進(jìn)入膠中,，相對遷移率為 0（Rm=0）,，而同等大小的直線雙鏈 DNA（剛性棒狀）則可以長軸方向前進(jìn)（Rm>0），由此可見,，這三種構(gòu)型的相對遷移率主要取決于凝膠濃度,，但同時(shí)，也受到電流強(qiáng)度,、緩沖液離子強(qiáng)度等的影響,。

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