日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

氧化型谷胱/甘肽(GSSG)含量測試盒說明書

                                              微量法100T/96S

注    意：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定,。

測定意義：

GSH/GSSG是細(xì)胞內(nèi)最重要的氧化還原對之一。因此,，測定細(xì)胞內(nèi)GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值,，能夠很好地反映細(xì)胞所處的氧化還原狀態(tài)，也是谷胱/甘肽氧化還原循環(huán)的主要指標(biāo)之一,。

測定原理：

利用2-VP法測GSSG含量,。

自備儀器和用品：

低溫離心機(jī)、水浴鍋,、可調(diào)節(jié)移液器,、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板,、和蒸餾水,。

試劑組成和配置：

試劑一：液體100mL×1瓶，4℃保存,。

試劑二：液體600μL×1支,，4℃保存。

試劑三：液體50mL×1瓶,，4℃保存,。

試劑四：液體2.5mL×1瓶,，4℃保存。

試劑五： 液體15μL×1瓶,，-20℃保存,。臨用前加入0.3mL試劑三稀釋，4℃保存,。

試劑六：粉劑×1瓶,，4℃保存。臨用前加入20 mL試劑三溶解,，現(xiàn)配現(xiàn)用,。

粗酶液提取：

1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織,，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿,。8000g 4℃離心10min，取上清液（如上清不清澈,，再離心3min）待測,。

2. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL試劑一）,，冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w,，超聲3秒，間隔7秒,，總時間3min）,；8000g 4℃離心10min，取上清液（如上清不清澈,，再離心3min）混勻待測,。

3. 血清等液體：直接測定。

GSSG含量測定：

1. 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min,，調(diào)節(jié)波長到412nm,，蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑三置于25℃（一般物種）或者37℃（哺乳動物）水浴中保溫30min,。

3.取1 mL EP管,，加入100μ L上清液，5 μ L試劑二,，蓋緊后混勻,，得混合液，置于37℃水浴30min,；取21μ L混合液于96孔板,，然后依次加入20 μ L試劑四、2 μ L試劑五和140 μ L試劑六,，迅速混勻后,，測定30 s和150 s光吸收A1和A2,，計算ΔA=A2-A1。

GSSG含量計算公式：

a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1,、標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y=0.0276x-0.0011,；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（nmol/mL），y為吸光值(ΔA),。

2、 按蛋白濃度計算

GSSG（nmol/mg prot）=(ΔA+0.0011)÷0.0276×V樣÷(V樣×Cpr)

=36.23×(ΔA+0.0011)÷Cpr

3,、按樣本鮮重計算

GSSG（nmol /g 鮮重）=(ΔA+0.0011)÷0.0276×V樣÷(V樣÷V樣總×W)

=36.23×(ΔA+0.0011)÷W

4,、按細(xì)胞數(shù)量計算

GSSG（nmol/10⁴ cell）=(ΔA+0.0011)÷0.0276×V樣÷(V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量)

=36.23×(ΔA+0.0011)÷細(xì)胞數(shù)量

5、按照液體體積計算

GSSG（nmol/mL）=(ΔA+0.0011)÷0.0276×V樣÷V樣

=36.23×(ΔA+0.0011)

V樣：反應(yīng)中加入樣本體積,，20μL,；V樣總：加入提取液體積， 1mL,；W：樣品質(zhì)量,，g，Cpr：樣本蛋白濃度（mg/mL）

b.使用96孔板測定的計算公式如下

1,、標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y=0.0138x-0.0011,；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（nmol/mL），y為吸光值(ΔA),。

2,、 按蛋白濃度計算

GSSG（nmol/mg prot）=(ΔA+0.0011)÷0.0138×V樣÷(V樣×Cpr)

=72.46×(ΔA+0.0011)÷Cpr

3、按樣本鮮重計算

GSSG（nmol /g 鮮重）=(ΔA+0.0011)÷0.0138×V樣÷(V樣÷V樣總×W)

=72.46×(ΔA+0.0011)÷W

4,、按細(xì)胞數(shù)量計算

GSSG（nmol/10⁴ cell）=(ΔA+0.0011)÷0.0138×V樣÷(V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量)

=72.46×(ΔA+0.0011)÷細(xì)胞數(shù)量

5,、按照液體體積計算

GSSG（nmol/mL）=(ΔA+0.0011)÷0.0138×V樣÷V樣

=72.46×(ΔA+0.0011)

V樣：反應(yīng)中加入樣本體積，20μL,；V樣總：加入提取液體積,， 1mL；W：樣品質(zhì)量,，g,，Cpr：樣本蛋白濃度（mg/mL）

注意事項

1.提取過程中去掉蛋白質(zhì)，所以提取液不能用于測定蛋白含量,。

2.臨用前配制的試劑配好后4℃保存,，2天內(nèi)使用完畢。

3.Z低檢出限為0.1μmol/L,。

4.反應(yīng)溫度嚴(yán)格來說,，為保證重復(fù)性，應(yīng)在25℃下進(jìn)行反應(yīng),。

5. 反應(yīng)時間需精確控制,，否則會影響反應(yīng)速率計算,，產(chǎn)生較大誤差。

6. 樣品中的GSSG濃度盡可能低一些,，否則反應(yīng)速率太大,，沒法控制，所以稀釋倍數(shù)要盡量大些,。

氧化型谷胱/甘肽(GSSG)含量測試盒僅供科研,！