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| 參考價 | ￥520-￥980 |
參考價：￥520 ~ ￥980
100管/96樣 50管/48樣
CAS:詳見說明書 純度:詳見說明書 分子量:詳見說明書 分子式:詳見說明書 供貨周期:現(xiàn)貨 規(guī)格:100管/96樣、50管/48樣 貨號:YLK-SH125 應(yīng)用領(lǐng)域:化工,生物產(chǎn)業(yè) 主要用途:科研
>| 100管/96樣 | 980元 | 209盒 可售 |
| 50管/48樣 | 520元 | 178盒 可售 |
更新時間：2024-06-29 15:34:46瀏覽次數(shù)：861評價
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| CAS | 詳見說明書 | 純度 | 詳見說明書 |
|---|---|---|---|
| 分子量 | 詳見說明書 | 分子式 | 詳見說明書 |
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100管/96樣,、50管/48樣 |
| 貨號 | YLK-SH125 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
| 主要用途 | 科研 | 測定方法： | 微量法、可見分光光度法 |
NADP磷酸酶（NADPase）試劑盒說明書
微量法 100管/96樣
注 意：正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
NADPase主要存在于植物組織中,，是生物體內(nèi)唯yi催化NADP+降解為NAD+的酶,，與NADK一起調(diào)控NAD和NADP之間的平衡。
測定原理：
NADPase能夠催化NADP+水解為NAD+和無機磷的反應(yīng),，通過測定無機磷的量來測定NADPase活性,。
所需的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、恒溫水浴鍋,、臺式離心機,、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板,、研缽,、冰和蒸餾水
試劑的組成和配制：
提取液：100mL×1瓶，4℃保存,。
試劑一：液體15 mL×1瓶,， 4℃保存。
試劑二：粉劑×4支,，-20℃保存,；用時加入1 mL試劑一充分溶解備用，現(xiàn)配現(xiàn)用,。
試劑三：粉劑×1 瓶, 4℃保存,。用時加入25mL蒸餾水，溶解后4℃可保存一周,。
試劑四：粉劑×1瓶, 4℃保存,。用時加入25mL蒸餾水，溶解后4℃可保存一周,。
試劑五：液體 25mL×1 瓶,，室溫保存,。
試劑六：10mmol/L 標準磷貯備液 10mL×1 瓶，4℃保存,。
0.5μmol/mL 標準磷應(yīng)用液配制：將試劑六20倍稀釋,，即取 0.5mL試劑六加9.5蒸餾水，充分混勻,。
定磷試劑的配制：按H2O: 試劑三:試劑四:試劑五=2:1:1:1 的比例配制,，配好的定磷試劑
應(yīng)為淺黃色，若無色則試劑失效,，若是藍色則為磷污染,，定磷劑現(xiàn)用現(xiàn)配。
注意：配試劑最好用新的燒杯,、玻棒和玻璃移液器,，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染,。
樣本的前處理：
按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液）,，進行冰浴勻漿,。8000g 4℃離心10min，取上清,，置冰上待測,。
操作步驟：
1、分光光度計或酶標儀預(yù)熱30min以上,，調(diào)節(jié)波長至660nm,，蒸餾水調(diào)零。
2,、酶促反應(yīng)（在EP管中加入下列試劑）
試劑名稱（μL） | 測定管 | 對照管 |
試劑一 | 120 | 120 |
試劑二 | 40 | 40 |
37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）預(yù)熱5min
樣本 | 40 | |
蒸餾水 | 40 |
37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）準確反應(yīng)30min后,，95℃水浴5min（蓋緊，以防止水分散失）,，冷卻后,，10000g 25℃離心5min，取上清
3,、定磷（在EP管或96孔板中加入下列試劑）
標準管 | 空白管 | 測定管 | 對照管 | |
0.5μmol/ml標準磷應(yīng)用液 | 20 | |||
蒸餾水 | 20 | |||
上清液 | 20 | 20 | ||
定磷試劑 | 200 | 200 | 200 | 200 |
混勻,，25℃室溫放置30min，在 660nm處,，記錄各管吸光值,。
注意事項：
1、此法具有微量,、靈敏,、快速的特點,。所以對測定所用試管要求嚴格，要沒有一點磷,，若試管放過磷酸或磷酸鹽緩沖液,，一定要洗得非常干凈，要先用洗潔精加水煮,，再用自來水沖,，最后用蒸餾水沖干凈。最好用一次性塑料管或新玻璃管,，避免磷污染是檢測成敗的關(guān)鍵,。
2、標準管,、空白管和對照管只要做一次即可,。
NADPase酶活性計算：
1、按組織蛋白濃度計算：
定義：每小時每毫克組織蛋白NADPase分解NADP 產(chǎn)生1μmol無機磷的量為一個 NADPase活力單位,。
NADPase (μmol/h/mg prot)=(C標準管×V總)×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)÷
(V樣×Cpr)÷T=5×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)÷Cpr
2,、按樣本鮮重計算：
定義：每小時每g組織NADPase分解NADP 產(chǎn)生1μmol無機磷的量為一個 NADPase活力單位。
NADPase (μmol/h /g鮮重)=(C標準管×V總)×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管）×V總÷(W× V樣÷V樣總)÷T=5×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)÷W
C標準管：標準管濃度,，0.5μmol/mL,；V總：酶促反應(yīng)總體積，0.2mL,；V樣：加入樣本體積,，0.04mL ；V樣總：加入提取液體積,，1mL,；T：反應(yīng)時間，0.5小時,；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL；W：樣本鮮重,，g,。
NADP磷酸酶（NADPase）試劑盒僅供科研！
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