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肌酸激酶（CK）測定試劑盒說明書

                                                 微量法100T/96S

注    意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定,。

測定意義：

CK(EC 2.7.3.2)主要存在于心臟,、肌肉以及腦等組織中，能可逆地催化肌酸與ATP之間的轉磷?；磻?，在能量運轉、肌肉收縮和ATP再生中有重要作用,，是臨床診斷心腦疾病的一個重要指標,。

測定原理：

CK催化磷酸肌酸和ADP生成肌酸和ATP，己糖激酶催化ATP與葡萄糖形成6-磷酸葡萄糖,，6-磷酸葡萄糖脫氫酶催化6-磷酸葡萄糖與NADP+生成NADPH,，導致340nm光吸收值增加。

自備實驗用品及儀器：

天平,、低溫離心機,、恒溫水浴鍋、酶標儀,、96孔板和蒸餾水,。

試劑組成和配制：

提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存,。

試劑一：粉劑1瓶,，4℃避光保存,，使用前加10mL蒸餾水溶解。

試劑二：液體10mL×1瓶,，4℃保存,。

工作液：臨用前根據用量將試劑一和試劑二以1:1混合。使用前37℃溫育2min,。

粗酶液提?。?/span>

1.        組織樣本：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液）進行冰浴勻漿,，然后10000g,，4℃，離心15min,。

2.        血清樣本：直接測定,。

測定操作表：

1. 酶標儀預熱30min，調節(jié)波長至340nm,。

2．在96孔板中加入40μL樣本和60μL蒸餾水,，最后加入100μL工作液，立即混勻,，37℃下測定初始吸光值A1與1min后的吸光值A2,，ΔA＝A2-A1。

CK活性計算公式：

（1）按組織蛋白含量計算

酶活定義：37℃,，pH7.0時,，每毫克蛋白質1min內催化產生1nmol NADPH為一個酶活單位。

CK活性（nmol/min/ mg prot）=×V反總÷（V樣×Cpr）÷T= 1608×△A÷Cpr

（2）按組織樣本質量計算：

酶活定義：37℃,，pH7.0時,，每克樣品1min內催化產生1nmol NADPH為一個酶活單位。

CK活性（nmol/min/g 鮮重）= ×V反總÷（V樣÷V樣總×W）÷T= 1608×△A÷W

（3）按血清計算：

酶活定義：37℃,，pH7.0時,，每升血清1min內催化產生1nmol NADPH為一個酶活單位。

CK活性（nmol/min/mL）=×V反總÷V樣÷T= 1608×△A

：NADPH摩爾消光系數,，6220 L /mol/cm,；d：96孔板光徑，0.5cm,；V反總：反應體系總體積,，0.2mL；V樣：反應體系中樣本體積,，0.04mL,；T，反應時間，1min,；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL,；W：樣本質量,，g

注意事項：

1. 配制好的工作液4℃穩(wěn)定7天，請配制后盡快使用,。

2. 血清的CK不穩(wěn)定,，采集樣本后盡快測定，4℃避光保存可穩(wěn)定24h,。

3. 樣品蛋白質含量需要另外測定,，可選用BCA蛋白含量測定試劑盒進行測定。

4. OD值大于0.5可用提取液適當稀釋樣品,，并在計算公式中相應的改變稀釋倍數,。

肌酸激酶（CK）測定試劑盒僅供科研！