日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

還原型谷胱/甘肽（GSH）試劑盒說(shuō)明書(shū)

 微量法100T/96S

注    意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定,。

測(cè)定意義：

GSH是細(xì)胞內(nèi)最主要的抗氧化巰基物質(zhì),，在抗氧化、蛋白質(zhì)巰基保護(hù)和氨基酸跨膜運(yùn)輸?shù)戎芯哂兄匾饔?。還原型與氧化型比值（GSH/GSSG）是細(xì)胞氧化還原狀態(tài)的主要?jiǎng)討B(tài)指標(biāo),。因此，測(cè)定細(xì)胞內(nèi)GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值,，能夠很好地反映細(xì)胞所處的氧化還原狀態(tài),。

測(cè)定原理：

DTNB與GSH反應(yīng)生成復(fù)合物，在412nm處有特征吸收峰,；其吸光度與GSH含量成正比,。

自備儀器和用品：

低溫離心機(jī),、水浴鍋,、可調(diào)節(jié)移液器、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀,、微量玻璃比色皿/96孔板,、和蒸餾水,。

試劑組成和配制：

試劑一：液體×1瓶，4℃保存,。

試劑二：液體×1瓶,，4℃保存。

試劑三：液體×1瓶,，4℃避光保存,。

粗酶液提取：

1.        組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織,，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿,。8000g，4℃離心10min,，取上清置冰上待測(cè),。

2.        細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴個(gè)）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL試劑一）,，冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w,，超聲3秒，間隔7秒,，總時(shí)間3min）,；然后8000g，4℃,，離心10min,，取上清置于冰上待測(cè)。

3.        血清等液體：直接測(cè)定,。

GSH測(cè)定操作：

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min,，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到412 nm，蒸餾水調(diào)零,。

2. 試劑二置于25℃（一般物種）或者37℃（哺乳動(dòng)物）水浴中保溫30min,。

3. 空白管：取微量玻璃比色皿或96孔板，依次加入20μL蒸餾水,，140μL試劑二,，40μL試劑三，混勻靜置2min后測(cè)定412 nm吸光度A1,。

4. 測(cè)定管：取微量玻璃比色皿或96孔板,，依次加入20μL上清液，140μL試劑二,，40μL試劑三,，混勻靜置2min后測(cè)定412 nm吸光度A2。

注意：空白管只需要測(cè)定一次,。

GSH含量計(jì)算公式：

GSH標(biāo)準(zhǔn)曲線公式：y=1.5 x（x為GSH濃度,，μ mol /mL；y為吸光值）

a.使用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

（1）按蛋白濃度計(jì)算

GSH（μ mol/ mg prot）=(A2－A1) ÷1.5×V樣÷（V樣×Cpr） =0.667×(A2－A1) ÷Cpr

（2）按樣本質(zhì)量計(jì)算

GSH（μ mol/g 鮮重）=(A2－A1) ÷1.5×V樣÷(V樣÷V樣總×W)=0.667×(A2－A1) ÷W

（3）按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

GSH（μ mol /10⁴ cell）=(A2－A1) ÷1.5×V樣÷(V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量)=0.667×(A2－A1) ÷細(xì)胞數(shù)量

（4）按液體體積計(jì)算

GSH（μ mol/ mL）=(A2－A1) ÷1.5×V樣÷V樣 =0.667×(A2－A1)

V反總：反應(yīng)總體積,，0.2mL,；V樣總：上清液總體積，1 mL,；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積,，20μL=0.02 mL；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL,；W：樣品質(zhì)量

b.使用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

GSH標(biāo)準(zhǔn)曲線公式：y=0.75x（x為GSH濃度，μ mol /mL,；y為吸光值）

（1）按蛋白濃度計(jì)算

GSH（μ mol/ mg prot）=(A2－A1) ÷0.75×V樣÷V樣÷Cpr =1.334×(A2－A1) ÷Cpr

（2）按樣本鮮重計(jì)算

GSH（μ mol/g 鮮重）=(A2－A1) ÷0.75×V樣÷(V樣÷V樣總×W)=1.334×(A2－A1) ÷W

（3）按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

GSH（μ mol /10⁴ cell）=(A2－A1) ÷0.75×V樣÷(V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量)=1.334×(A2－A1) ÷細(xì)胞數(shù)量

（4）按液體體積計(jì)算

GSH（μ mol/ mL）=(A2－A1) ÷0.75×V反總÷V樣 =1.334×(A2－A1)

V樣總：上清液總體積,，1mL；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積,，20μL=0.02 mL,；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度，mg/mL,；W：樣品質(zhì)量,，g。

注意事項(xiàng)：

1.        試劑一中含有蛋白質(zhì)沉淀劑,，因此上清液不能用于蛋白濃度測(cè)定,。

2.        Z低檢出限為0.011mmol/L。

還原型谷胱/甘肽（GSH）試劑盒僅供科研,！