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| 參考價 | ￥520-￥1000 |
參考價：￥520 ~ ￥1000
100管/96樣 50管/48樣
CAS:詳見說明書 純度:詳見說明書 分子量:詳見說明書 分子式:詳見說明書 供貨周期:現(xiàn)貨 規(guī)格:100管/96樣、50管/48樣 貨號:YLK-SH136 應用領域:化工,生物產(chǎn)業(yè) 主要用途:科研
>| 100管/96樣 | 1000元 | 117盒可售 |
| 50管/48樣 | 520元 | 98盒可售 |
更新時間：2024-06-29 08:22:21瀏覽次數(shù)：1003評價
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| CAS | 詳見說明書 | 純度 | 詳見說明書 |
|---|---|---|---|
| 分子量 | 詳見說明書 | 分子式 | 詳見說明書 |
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100管/96樣,、50管/48樣 |
| 貨號 | YLK-SH136 | 應用領域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
| 主要用途 | 科研 | 測定方法： | 微量法、可見分光光度法 |
抗壞血酸氧化酶（AAO）活性測定試劑盒說明書
微量法100T/96S
注 意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義：
AAO是定位于植物細胞壁的糖蛋白,，屬“藍銅氧化酶"家族,。細胞壁內(nèi)的抗壞血酸和AAO與細胞壁的代謝和生長有著密切的聯(lián)系。AAO 氧化 AsA 所形成的 MDHA 可通過質(zhì)膜上的細胞色素b還原,，該過程中電子的跨膜運輸能夠促進細胞生長,。
測定原理：
AAO可直接氧化AsA,，通過測定AsA的氧化量，可計算得AAO活力,。
實驗中所需儀器及設備：
低溫離心機,、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板（UV板）,、可調(diào)式移液器,、研缽、冰,、蒸餾水,。
試劑組成和配制：
試劑一：液體100mL×1瓶，4℃保存,。
試劑二：液體20mL×1瓶,，4℃保存。
試劑三：粉劑×1瓶,，4℃保存,。臨用前加入2mL蒸餾水充分溶解。
粗酶液提?。?/span>
按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織,，加入1mL試劑一）進行冰浴勻漿。16000g,，4℃離心10min,，取上清置冰上待測。
AAO測定操作：
1. 分光光度計/酶標儀預熱30 min,，調(diào)節(jié)波長到265 nm,。
2. 試劑二在25℃水浴鍋中預熱30 min。
3. 依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL上清液,、170μL預熱的試劑二和10μL試劑三,，迅速混勻后在265nm測定10s和130s光吸收A1和A2，△A =A1-A2,。
AAO活性計算公式：
a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下
(1). 按蛋白濃度計算
AAO活性單位定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol AsA 為1個酶活單位,。
AAO(nmol/min /mg prot) = △A÷(ε×d）×V反總×109÷(Cpr×V樣)÷T
= 92.4×△A÷Cpr
(2). 按樣本質(zhì)量計算
AAO活性單位定義：25℃中每克樣本每分鐘氧化1nmol AsA 為1個酶活單位。
AAO(nmol/min/g 鮮重) = △A÷(ε×d）×V反總×109÷(W×V樣÷V樣總)÷T
= 92.4×△A÷W
ε：AsA在265nm處摩爾吸光系數(shù)為5.42×104 L/mol/cm,；d：比色皿光徑（cm）,，1 cm； V反總：反應體系總體積（L）,，200μL=2×10-4 L,；106：1mol=1×106μmol,；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度（mg/mL）,，需要另外測定,，建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測定試劑盒；W ：樣品質(zhì)量,；V樣：加入反應體系中上清液體積（mL）,，20μL=0.02 mL；V樣總：提取液體積,，1 mL,；
T：催化反應時間（min），2min,。
b.使用96孔板測定的計算公式如下
(1). 按蛋白濃度計算
AAO活性單位定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol AsA 為1個酶活單位,。
AAO(nmol/min /mg prot) = △A÷(ε×d）×V反總×109÷(Cpr×V樣)÷T
=184.8×△A÷Cpr
(2). 按樣本質(zhì)量計算
AAO活性單位定義：25℃中每克樣本每分鐘氧化1nmol AsA 為1個酶活單位。
AAO(nmol/min/g 鮮重) = △A÷(ε×d）×V反總×109÷(W×V樣÷V樣總)÷T
= 184.8×△A÷W
ε：AsA在265nm處摩爾吸光系數(shù)為5.42×104 L/mol/cm,；d：96孔板光徑（cm）,，0.5 cm； V反總：反應體系總體積（L）,，200μL=2×10-4 L,；106：1mol=1×106μmol；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度（mg/mL）,，需要另外測定,，建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測定試劑盒；W ：樣品質(zhì)量,；V樣：加入反應體系中上清液體積（mL）,，20μL=0.02 mL；V樣總：提取液體積,，1 mL,；
T：催化反應時間（min），2min,。
注意事項:
配制好的試劑放在4℃保存,，三天內(nèi)使用完。
抗壞血酸氧化酶（AAO）活性測定試劑盒僅供科研,！
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